主权项 |
一种溶剂提取‑荧光测定微藻油脂含量的方法,其特征在于包括如下步骤:(1)标准曲线的制作:取微藻,离心后取沉淀,用PBS缓冲液清洗干净,然后用PBS缓冲液稀释成藻液,作为标准藻液;取5份19.8mL标准藻液,分别加入200μL异丙醇、180μL异丙醇+20μL三油精、160μL异丙醇+40μL三油精、140μL异丙醇+60μL三油精、120μL异丙醇+80μL三油精,配制不同浓度的三油精溶液;分别往三油精溶液中依次加入二甲基亚砜和尼罗红染色20分钟,测定各三油精溶液的荧光强度,以吸光度为纵坐标、三油精溶液浓度为横坐标,绘制标准曲线,计算回归方程;二甲基亚砜的体积浓度为20%,尼罗红的浓度为0.3μg/mL;(2)微藻油脂的提取:取干燥的微藻,加入2mol/L KOH‑CH3OH溶液,65℃~85℃水浴加热8~15min,冷却至室温后加入2mol/L HCl‑CH3OH溶液,65℃~85℃水浴加热8~15min,冷却至室温后加入正己烷,静置,分层,取正己烷层,得到待测溶液;每克微藻加入4~8mL2mol/L的KOH‑CH3OH溶液,每克微藻加入8~16mL2mol/L的HCl‑CH3OH溶液,每克微藻加入4~8mL正己烷;(3)荧光测定微藻油脂的含量:将0.2mL步骤(2)制备的待测溶液加入19.8mL步骤(1)制备的标准藻液中,得到样品藻液;将0.2mL正己烷加入19.8mL步骤(1)制备的标准藻液中,得到空白样品;分别往样品藻液、空白样品中依次加入二甲基亚砜和尼罗红染色20分钟,分别测定样品藻液、空白样品的荧光强度,样品藻液的荧光强度减去空白样品的荧光强度,得到待测溶液的荧光强度,由回归方程计算待测溶液中微藻油脂的浓度,计算微藻油脂的含量。 |