| 摘要 |
1. Способ детектирования активности эндопептидаз с измененной нацеленностью, включающий этапы:а. обработки клетки из стабильной клеточной линии образцом, содержащим эндопептидазу с измененной нацеленностью, причем указанная клетка из стабильной клеточной линии чувствительна к активности указанной эндопептидазы с измененной нацеленностью при концентрации эндопептидазы с измененной нацеленностью около 500 пМ или ниже;б. выделения из обработанной клетки компонента SNAP-25, содержащего продукт расщепления SNAP-25, карбоксильный конец которого соответствует глутамину разрезаемой связи в сайте расщепления токсином BoNT/A;в. осуществления контакта компонента SNAP-25 с анти-SNAP-25 антителом, иммобилизованным на твердофазной подложке,при этом анти-SNAP-25 антитело связывается с эпитопом, карбоксильный конец которого соответствует глутамину разрезаемой связи в сайте расщепления токсином BoNT/A, из продукта расщепления SNAP-25, анти-SNAP-25 антитело характеризуется константой скорости ассоциации для эпитопа из SNAP-25, не содержащего карбокси-концевой глутамин разрезаемой связи в сайте расщепления токсином BoNT/A, из продукта расщепления SNAP-25, составляющей менее 1×10Мс; и анти-SNAP-25 антитело характеризуется равновесной константой диссоциации для эпитопа, составляющей менее 0,450 нМ;г. детектирования присутствия комплекса антитело-антиген, включающего анти-SNAP-25 антитело и продукт расщепления SNAP-25, карбоксильный конец которого соответствует глутамину разрезаемой связи в сайте расщепления токсином BoNT/A;при этом детектирование с помощью указанного комплекса антитело-антиген является показателем активности эндопептидазы с измененной нацеленн� |
