蛋白酶

摘要

本发明涉及肽酶家族S2A或S1E的丝氨酸蛋白酶新种类，其在存在铜(Cu2+)时是稳定的，和/或只被铜抑制到有限的程度。也公开了针对这种影响的潜在的相关结构特性。这个种类的蛋白酶包括来源于Brachysporiellagayana、达松维尔拟诺卡氏菌达松维尔亚种、Nocardiopsis prasina、和Nocardiopsis alba的蛋白酶，但是排除来源于金龟子绿僵菌和拟诺卡氏菌种NRRL 18262的已知蛋白酶。本发明也涉及编码这种蛋白酶的DNA，其在包括动植物细胞的宿主细胞中的表达，及其在例如动物饲料和清洁剂中的用途。特别地，本发明涉及动物饲料和动物饲料添加剂，例如预混合料，将这些蛋白酶与1-500 ppm的Cu(饲料中的浓度)一起掺入。

主权项

一种肽酶家族S2A和/或肽酶家族S1E的蛋白酶，其i)在pH7和25℃下，在补充有0.1％K‑Sorbate的分析缓冲液中，并且在存在1mM的Cu2+时培养164小时后，测量的残余活性相对于培养0小时后的活性，具有至少0.80的残余活性；和/或ii)相对于没有Cu2+的对照，在存在1mM的Cu2+时，具有至少0.67的相对活性；其中i)和ii)的活性测量是在pH7.0和25℃，在分析缓冲液中，在底物Suc‑AAPF‑pNA上测量的；并且其中对于i)的测量值，蛋白酶具有经SDS‑PAGE确定的至少90％的纯度；其蛋白酶iii)当根据图1排列时，其包括的氨基酸序列包括下列至少一个序列：a)(T120+R122+T127+Y129)、(T120+N122+P127+F129)、或(T120+S122+T127+Q129)；和/或b)(T91+T176+I179+N180)、或(S91+N176+L179+E180)，其中每个氨基酸残基的编号相应于SEQ ID NO：2的第1‑188位氨基酸的编号，其中所述排列是通过Needleman‑Wunsch序列对比的程序″align″进行与SEQ ID NO：2、4、6、8、10、12、和14的成对对比、从获得的排列中选择具有最高程度同一性的排列、并将该排列加入到图1中确定的，该程序″align″属于FASTA程序包版本v20u6，使用默认积分矩阵BLOSUM50用于多肽序列对比，对于多肽，缺口的第一个残基的罚分是‑12，缺口的进一步残基的罚分是‑2。