一种土壤和沉积物总DNA提取方法及提取试剂盒

摘要

本发明涉及一种土壤和沉积物总DNA提取方法及提取试剂盒，即首先应用腐殖酸溶解液，最大程度地溶解和去除土壤和沉积物中的腐殖酸，再将剩余腐殖酸进行络合沉淀，然后无选择地裂解释放细菌体内的基因组DNA，离心后去除溶液中的络合腐殖酸和蛋白质，而含DNA的上清溶液则通过酸碱调节试剂和高盐溶液调节后，以硅胶吸附膜特异吸附而使基因组DNA得以纯化回收。本发明的方法可以在较短时间内同时提取多个样品，正常操作时间小于70min，可以获得高纯度、适合下游分析的大量DNA样品。依据本发明方法建立的试剂盒获得的DNA样品纯度高，无降解，可直接用于后续分子生物学分析，同时避免了传统DNA提取方法需要酚/氯仿等毒性试剂纯化DNA的步骤，具有广阔的应用前景。

主权项

一种土壤和沉积物总DNA提取试剂盒，包括如下组分：1）高效DNA分离柱：包含腐殖酸溶解液和海砂；所述的腐殖酸溶解液的配方为100~200 mmol/L Tris，50~100 mmol/L Na4P2O7，50~100 mmol/L Na2EDTA，1.0~3.0% PVP，100~200 mmol/L NaCl，0.05~0.1% Triton X‑100，pH 8.0~10.0；2）腐殖酸络合剂：0.20 mol/L 氯化钙溶液，pH 5.5~7.5；3）细胞裂解液：50~100 mmol/L Tris‑HCl，1.5~3.5 mol/L NaCl，1%~3% CTAB，pH 8.0~10.0；4）变性剂：20%SDS，pH 9.0；5）酸碱调节剂：0.5~1.5 mol/L 醋酸钾，pH 4.8~6.0；6）高盐溶剂：3.0~6.0 mol/L 盐酸胍，pH 5.0~8.0；7）清洗液：70%乙醇；8）洗脱液：2~10 mmol/L Tris‑HCl，pH 8.0~9.0；9）基因组DNA吸附柱：包含硅胶吸附膜内柱的2 mL离心管套装。