表达乙型脑炎病毒PrM/M-E蛋白的重组BHK细胞系及其应用

摘要

本发明公开了一种稳定表达乙型脑炎病毒PrM/M-E蛋白的重组幼仓鼠肾细胞系(BHK21)，更具体地，表达PrM/M-E蛋白重组细胞系为BHK-JEV-ME，该细胞系保藏在微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，其菌种保藏编号为：CGMCC No.5263。本发明还公开了制备所述重组细胞系的方法和该重组细胞系在制备预防乙型脑炎的疫苗中的应用。

主权项

一种稳定表达编码乙型脑炎病毒PrM/M‑E蛋白基因的重组BHK细胞系，其特征在于由以下方法构建得到：(1)构建真核表达质粒，该真核表达质粒包括其中插入编码乙型脑炎病毒PrM/M‑E蛋白的基因的序列，所述编码乙型脑炎病毒PrM/M‑E蛋白的基因的序列如SEQ ID No.2所示；(2)将所述真核表达质粒转染BHK21细胞；(3)经质粒转染的细胞以添加了G418的培养液选择培养；(4)将经选择培养的细胞进行稀释克隆，收获克隆细胞培养上清液与细胞，检测并比较乙型脑炎病毒PrM/M与E蛋白的表达量，获得稳定表达乙型脑炎病毒PrM/M‑E蛋白的重组BHK细胞系。