一种免疫荧光组织化学技术

摘要

本发明属于免疫分析和生物技术应用领域，具体为一种免疫荧光组织化学技术，解决现有免疫荧光组织化学技术在使用过程中存在诸多缺陷的问题，包括：初染，分析蛋白A和蛋白B在待测细胞或组织切片的表达情况；然后复染：利用磷酸盐缓冲液清洗待测细胞或组织切片，镜检观察至荧光消失；重新封闭；孵育待测细胞或组织切片中所含待测蛋白C的相应一抗，然后孵育荧光素标记的二抗；DAPI复染；普通荧光显微镜镜检、拍照，得到待测蛋白C的镜检照片，与初染得到的镜检照片进行叠加，分析已测蛋白A、B和待测蛋白C的表达情况。操作可控性强、特异性强、准确度高、用较低的实验成本实现较高的研究要求，为临床免疫荧光组织化学研究提供广泛的应用范围。

主权项

一种免疫荧光组织化学技术，其特征是包括以下步骤：（1）初染①、制备待测细胞或组织切片；②、用H2O2/甲醇处理，降低内源性过氧化物酶所造成的非特异性背景；③、暴露抗原结合位点；④、封闭； ⑤、同时或单独孵育待测细胞或组织切片中所含待测蛋白A的相应一抗和所含待测蛋白B的相应一抗， ⑥、同时或单独孵育待测蛋白A的荧光素标记的二抗和待测蛋白B的荧光素标记的二抗；⑦、DAPI初染；⑧、普通荧光显微镜镜检、拍照，分析蛋白A和蛋白B在待测细胞或组织切片的表达情况；（2）复染①、利用磷酸盐缓冲液清洗进行初染后的待测细胞或组织切片，镜检观察至荧光消失；②、重新封闭；    ③、孵育待测细胞或组织切片中所含待测蛋白C的相应一抗，然后孵育荧光素标记的二抗；④、DAPI复染⑤、普通荧光显微镜镜检、拍照，得到待测蛋白C的镜检照片，将其与初染得到的镜检照片进行叠加，进而在同一标本层面分析已测蛋白A、已测蛋白B和待测蛋白C的表达情况；可以重复上述复染的步骤，分别得到待测细胞或组织切片中相关待测蛋白的镜检照片，然后在同一标本层面分别分析所有已测蛋白与待测蛋白的表达情况。