除草剂2,4-D-杀虫剂CHI二联检测卡及其制备方法

摘要

本发明除草剂2,4-D-杀虫剂CHI二联检测卡及其制备方法，涉及环境激素检测技术领域。本发明的检测卡外壳中有试纸条，由PVC胶板、样品垫、胶体金结合垫、包被膜和吸水垫组成；胶体金膜为含2,4-D单克隆抗体、CHI单克隆抗体胶体金标记物的玻璃纤维素膜，包被膜是硝酸纤维素膜，其上设有二条检测线T线和一条质控线C线，检测线T线依次包被有2,4-D蛋白质偶联物、CHI蛋白质偶联物，质控线C线包被有兔抗鼠IgG抗体。本发明可同时检测出水样中除草剂2,4-D和杀虫剂CHI，方法简单、方便、快捷，结果准确。

主权项

除草剂2,4‑D和杀虫剂CHI二联胶体金检测卡，其特征在于按照下述步骤制备得到：胶体金溶液制备：取1 L 三角烧瓶1个，加入超纯水495 mL，而后加入1%氯金酸HAuCl4·3H2O 5 mL，配制成500 mL 0.01%氯金酸水溶液，加热煮沸后在持续搅拌的情况下加入1%柠檬酸三钠Na3C6H5O7·2H2O溶液5‑7 mL，继续搅拌加热，当溶液的颜色完全变为透明的紫红色时，维持5 min后停止加热，补水至原体积，冷却至室温，2‑8℃保存备用；抗体的预处理：将要标记的2,4‑D或CHI单克隆抗体在1000 r/min, 4℃条件下，离心20 min，取上清，用0.01 mol/L PBS 稀释成1 mg/mL；或者用0.01 mol/L PBS 将要标记的2,4‑D或CHI单克隆抗体稀释成1 mg/mL，过0.22 µm滤膜；胶体金标记物的制备：取步骤(1)中的胶体金溶液40 mL，用0.25 mol/L K2CO3调节胶体金溶液pH至 8.5，电磁搅拌器250 r/min搅拌，逐滴加入4 mL 含0.3 mg 2,4‑D或CHI单克隆抗体的蛋白溶液，反应10 min；逐滴加入4 mL 10% BSA，继续搅拌反应10 min；金标抗体溶液常温1500 r/min离心20 min，弃去由凝聚的金颗粒形成的沉淀；红色上清溶液4℃，12000 r/min 离心20 min，弃上清，收集沉淀，将沉淀用金标抗体稀释液定容至1 mL，制备成2,4‑D单克隆抗体或CHI单克隆抗体的胶体金标记物；胶体金膜的制备：将步骤(3)2,4‑D单克隆抗体和CHI单克隆抗体的胶体金标记物依次用划膜仪以5 µL/cm的浓度均匀喷在载体玻璃纤维素膜上，室温自然晾干或者37℃烘干3 h，制成含2,4‑D单克隆抗体和CHI单克隆抗体的胶体金膜；包被膜制备：将兔抗鼠IgG抗体稀释成1 mg/mL、2,4‑D抗原稀释成0.3 mg/mL和CHI抗原稀释成0.5 mg/mL，用划膜仪依次以1 µL/cm的浓度喷涂在硝酸纤维素膜上，制备成包被膜，37℃包被2 h后，室温自然晾干或者37℃烘干；样品垫前处理：将样品垫处理液均匀涂布在玻璃纤维素膜上，在空气湿度低于60%的条件下，室温自然晾干；检测卡的组装：PVC胶板自上而下依次粘贴样品垫、胶体金膜、包被膜和吸水垫，组装成试纸条，切割成一定宽度长条，再将试纸条安装在长条扁平壳状的检测卡外壳中。