一种可同时检测多种赤潮藻的膜分类芯片的制备与应用方法

摘要

本发明公开了一种可同时检测多种赤潮藻的膜分类芯片的制备方法，包括以下步骤：（1）种特异性探针的合成；（2）探针溶液的配制；（3）探针阵列的设计；（4）尼龙膜处理；（5）探针点样及膜处理。现有的基因芯片需要芯片点样仪进行制备，杂交需要芯片杂交仪，杂交信号的检测需要荧光扫描仪，这些均是昂贵的仪器，而膜分类芯片的制备只需要毛细吸管或微量移液器，杂交可在杂交袋中进行，杂交信号可直接通过肉眼观察。现有基因芯片检测属高科技技术，操作复杂，对检测人员的技术要求高，而膜分类芯片制备和应用方法简单，适宜于推广应用。该芯片能同时检测自然样品中的6种常见赤潮藻，其操作流程简单，且不需要昂贵的仪器。

主权项

1.一种可同时检测多种赤潮藻的膜分类芯片的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：（1）种特异性探针的合成，按下表所示的序列信息合成检测探针：探针信息（2）探针溶液的配制：将合成的探针干粉溶解于0.1M Tris-HCl(pH7.5)，配制成浓度为10μM的溶液；（3）探针阵列的设计：探针阵列共8条探针，包括6条检测探针、1条阳性探针和1条阴性探针，每条探针各2个重复；（4）尼龙膜处理：在尼龙膜上划小格,每样为5×5mm²小格，共400mm²，将所用的尼龙膜剪下，在尼龙膜第一格的左上角用软铅笔点上点标记；将尼龙膜飘浮于双蒸水表面,让其吸水后沉入水中，再捞出浸泡于20×SSC中5min，再将膜放置于滤纸上晾干；（5）探针点样及膜处理：将配制的探针溶液用毛细吸管或移液器在上述制备的尼龙膜上点样0.5~1μl，自然晾干；将点样后的尼龙膜夹于两层滤纸中间,在80°C烘箱内处理2h。