一种变构酸的制备方法

摘要

本发明提供一种变构酸的制备方法，将变构霉素溶解于0.1-0.5M的缓冲液A中，配制成变构霉素溶液，再将脂肪酶溶解于缓冲液B中，配制酶液；将酶液加入到变构霉素溶液中，于25-40℃下反应0.5-5.0h，反应结束，将反应液pH调至4.0，用等体积的萃取溶剂A萃取；取水层将pH调至2.0并用等体积的萃取溶剂B萃取，取有机层，用饱和盐水洗涤后再用Na2SO4干燥，真空蒸馏浓缩溶剂，得到变构酸粗品；将所述变构酸的粗品再以乙酸和二氯甲烷溶剂为梯度洗脱的洗脱剂，取含变构酸的柱层析产品用丙酮重结晶，得到变构酸产品。本发明利用脂肪酶对发酵的变构霉素进行水解，获得变构酸，具有反应条件温和、反应专一、高效等优点。

主权项

1.一种如式（I）所示的变构酸的制备方法，其特征在于所述方法包括如下步骤：将变构霉素溶解于0.1-0.5M的缓冲液A中，配制成浓度为5000-50000μg/mL的变构霉素溶液，再将脂肪酶溶解于0.1-0.5M的缓冲液B中，配制成浓度为100-500U/mL的酶液；将酶液加入到变构霉素溶液中，并且变构霉素与脂肪酶活力之比为500-5000μg/U，于25-40℃下反应0.5-5.0h，反应结束，将反应液pH调至4.0，用等体积的萃取溶剂A萃取，分离出萃液层和水层；取水层将pH调至2.0并用等体积的萃取溶剂B萃取，取有机层，用饱和盐水洗涤后再用Na₂SO₄干燥，真空蒸馏浓缩溶剂，得到变构酸粗品；将所述变构酸的粗品再以乙酸和二氯甲烷溶剂为梯度洗脱的洗脱剂，经硅胶柱进行梯度洗脱，将收集到的洗脱液分别进行薄层层析，取含变构酸的柱层析产品，将得到的含变构酸的柱层析产品合并用丙酮重结晶，得到如式（I）所示的变构酸产品，所述缓冲液A与缓冲液B相同或不同，各自独立为下列之一：磷酸缓冲液、磷酸氢二钠-柠檬酸缓冲液、甘氨酸-氢氧化钠缓冲液；所述萃取溶剂A为下列之一：乙酸乙酯，氯仿，二氯甲烷，乙酸丁酯，苯；所述萃取溶剂B为下列之一：乙酸乙酯，氯仿，二氯甲烷，乙酸丁酯，苯；所述脂肪酶为酵母脂肪酶、黑曲霉脂肪酶或青霉脂肪酶；