一种利用广西金线莲蒴果快速繁育其种苗的方法

摘要

本发明公开了一种利用广西金线莲蒴果快速繁育其种苗的方法，它是以分布于广西桂林地区的野生金线莲进行人工授粉所得的蒴果为外植体，通过种子→原球茎→完整植株→移栽的途径快速繁育种苗。繁育过程中，种子和原球茎使用无激素培养，原球茎不经过继代培养直接分化成苗形成完整的小植株。一颗广西金线莲蒴果通过8~10月的组培培养，可快繁培育出10万株以上的优质组培苗，炼苗移栽成活率达到95％以上。该项技术操作简便，生产成本低，便于大规模工业化生产应用。利用该项技术繁殖金线莲，有利于保持种苗的优良性状，提高种苗使用的安全性，对濒危紧缺药用植物资源再生和持续利用具有十分积极的影响。

主权项

一种利用广西金线莲蒴果快速繁育其种苗的方法，包括如下步骤：（1）蒴果成熟度的选择：将野外采集的金线莲植株引种在人工资源圃内，于花期选择优良株系进行人工授粉和果实培育，金线莲蒴果在成熟过程中，内部种胚的颜色由乳白色浆状逐渐转变成金黄色的丝状，选取人工授粉后生长120~150天的未开裂蒴果；（2）种胚的萌发培养：将选取的蒴果材料经外表灭菌处理后，取出内部的种胚，均匀的撒播到萌发培养基上，在温度24~28℃、光照强度20µmol·m‑2·s‑1、光照时间12 h/d的条件下，培养25天后，种胚萌发形成原球茎；所述萌发培养基为MS+AC1.0g/L+蔗糖30g/L+琼脂6.0g/L，pH为5.8；（3）原球茎的分化：将播种后形成的原球茎及时转入分化培养基中，在温度24~28℃、光照强度30 µmol·m‑2·s‑1、光照时间12 h/d的条件下，培养20~30天，原球茎分化形成带叶的芽苗；所述分化培养基为MS+马铃薯汁200g/L +AC1.0g/L+蔗糖30g/L+琼脂6.0g/L，pH 5.8；（4）分化苗的增殖及壮苗培养: 将原球茎分化的幼嫩芽苗转接到增殖及壮苗培养基里，在温度24~28℃、光照强度40µmol·m‑2·s‑1、光照时间12 h/d的条件下，培养约30天培养出4~6cm高的健壮大苗；所述增殖及壮苗培养基为MS+香蕉汁100g/L +AC1.0g/L+蔗糖30g/L+琼脂6.0g/L，pH 5.8；（5）生根培养: 将已分化的广西金线莲芽苗转接到生根培养基上，在温度24~28℃、光照强度40µmol·m‑2·s‑1、光照时间12 h/d的条件下，培养约35天培养出5cm以上高根系发达的完整大苗；所述生根培养基为1/2MS+NAA0.5~1.0mg/L+蔗糖20g/L +琼脂6.0g/L，pH 5.8；（6）驯化及移栽：经过生根培养的健壮大苗，待根系生长发达后，进行出瓶移栽；出瓶前，将试管苗转移到温室大棚内炼苗15~20天，然后将试管苗从瓶中取出，小心地将根部附着的培养基洗净，待植株表面水分稍干进行种植，腐殖土或塘泥作为移栽基质，移栽后保持温度为22~28℃，湿度为75% ~80%，成活率达到95％以上。