一种海蜇基因组DNA的提取方法

摘要

本发明涉及基因工程技术，具体的说是一种海蜇基因组DNA的提取方法。具体为将海蜇用手术剪刀剪碎至无明显颗粒状组织，加入CTAB buffer、蛋白酶K，在55～56℃消化24～26小时至溶液澄清；或将海蜇置入95％的酒精中脱水并加入buffer、SDS、蛋白酶K，封口后55～56℃消化0.8～1.0小时；而后混合苯酚、氯仿和异戊醇，离心，吸上清，再加入氯仿和异戊醇混合液混匀，离心，吸上清；再在上清液中加异丙醇，沉淀10～15分钟，沉淀后取出，离心，弃去液体，并用乙醇，离心洗涤，将多余液体倒去室温自然凉干，即得到海蜇基因组DNA。采用本发明可提取高质量的海蜇全基因组DNA，且方法简单、经济、易于操作，适合在普通生物实验室中进行。

主权项

一种海蜇基因组DNA提取方法，其特征在于：1)将海蜇有性世代的海蜇碟状体置入体积浓度为95％的酒精中脱水并保存；2)将保存的蝶状体样品放入离心管中并直接加入buffer300～400μl匀浆、加入30～40μl质量浓度为10％的SDS、3～5μl浓度为20mg/ml的蛋白酶K，封口后55～56℃消化0.8～1.0小时，待用；所述buffer溶液含有0.01M Tris‑Hcl和0.1M EDTA；3)将步骤2)中消化后的溶液取出加入6M NaCl，振荡浑匀20～30S，10000～12000rpm离心20‑30分钟，吸上清，而后加入上清液的0.7～1倍体积的异丙醇，‑20～‑18℃沉淀10～15分钟，沉淀后取出，以10000～12000rpm离心15‑20分钟，弃去液体，并用体积浓度为70％的乙醇，离心洗1～2次，自然室温凉干，即得到海蜇碟状体的DNA。