混菌进化传代培养提高2-酮基-L-古龙酸产量的方法

摘要

本发明公开了混菌进化传代培养提高2-酮基-L-古龙酸产量的方法，包括如下步骤：(1)固体培养；(2)种子培养，将巨大芽孢杆菌和氧化葡糖杆菌接种到新的种子培养基中，在28-35℃，200-280r/min摇床振荡培养，以24h-48h为传代周期，以体积比为1％-10％为传代比接入新的种子培养基中，传代50-80天；(3)分纯；(4)发酵；本发明的方法通过混菌进化传代培养数十代后，能明显提高巨大芽孢杆菌和氧化葡糖杆菌的生长速度和氧化葡糖杆菌产2-酮基-L-古龙酸效率，从而可提高对培养基的利用效率，提高L-山梨糖的转化效率10％左右。

主权项

混菌进化传代培养提高2‑酮基‑L‑古龙酸产量的方法，其特征是包括如下步骤：（1）固体培养：取10‑500μL保藏于体积浓度为15‑30%的甘油水溶液中的氧化葡糖杆菌（Gluconobacter oxydans）和10‑500μL保藏于体积浓度为15‑30%的甘油水溶液中的巨大芽孢杆菌(Bacillus megaterium)分别接种于固体培养基上，28‑35℃，培养24‑48小时；（2）种子培养：将经步骤（1）培养的巨大芽孢杆菌和氧化葡糖杆菌分别转入种子培养基，在28‑35℃，200‑280r/min摇床振荡培养，24h‑48h，得到巨大芽孢杆菌种子液和氧化葡糖杆菌种子液；将巨大芽孢杆菌和氧化葡糖杆菌接种到新的种子培养基中，使巨大芽孢杆菌的密度为2×107‑2×1010cfu/ml，使氧化葡糖杆菌的密度为2×108‑2×1011cfu/ml，在28‑35℃，200‑280r/min摇床振荡培养，以24h‑48h为传代周期，以体积比为1%‑10%为传代比接入新的种子培养基中，传代50‑80天；（3）分纯：将步骤（2）获得的传代培养混菌菌株划线分纯，再分别接种于固体培养基上，28‑35℃培养24‑48小时；再分别转入种子培养基，在28‑35℃，200‑280r/min摇床振荡培养24h‑48h，得到进化了的巨大芽孢杆菌种子液和进化了的氧化葡糖杆菌种子液；（4）发酵：将原始巨大芽孢杆菌和进化了的氧化葡糖杆菌接种到发酵培养基中，使原始巨大芽孢杆菌的密度为2×107‑2×1010cfu/ml，使进化了的氧化葡糖杆菌的密度为2×108‑2×1011cfu/ml，在28‑35℃，200‑280r/min摇床振荡培养72h‑96h，获得2‑酮基‑L‑古龙酸。