突变群体的高通量筛选

摘要

揭示了高通量鉴定诱变群体成员中的基因突变的有效方法。所述方法包括DNA分离、集合、扩增、创建库、对库进行高通量测序(优选采用合成测序技术)、鉴定突变以及对群体成员的鉴定。

主权项

一种用于在诱变群体成员中检测目标序列中的突变的方法，包括步骤：(a)分离诱变群体每个成员的基因组DNA来提供每个群体成员的DNA样品；(b)集合步骤(a)中获得的DNA；(c)用一对引物从DNA集合中扩增目标序列；(d)集合步骤(c)的扩增产物来创建扩增产物库；(e)使用高通量测序测定扩增产物或片段的核苷酸序列；(f)通过聚类/联配片段的序列鉴定突变；(g)对于目标序列的修改的功能筛选鉴定的突变；(h)设计一个直接杂交到鉴定的突变上的引物；(i)用步骤(h)的引物和步骤(c)的引物中的一个扩增步骤(b)的库；(k)鉴定携带突变的群体成员。