主权项 |
一种1,3‑丙二醇氧化还原酶的辅酶特异性的改造方法,其特征在于:1,3‑丙二醇氧化还原酶基因来自克雷伯氏菌属、柠檬酸菌属或梭菌属,具有SEQ ID NO:1的序列,或者是SEQ ID NO:1的简并性序列,或者是所编码的序列因取代、缺失、插入和/或添加一个或几个氨基酸残基而与SEQ ID NO:1所编码序列有所不同,但仍具有相同酶活性的酶的核苷酸序列;1,3‑丙二醇氧化还原酶突变酶具有SEQ ID NO:2的序列,或者因取代、缺失、插入和/或添加一个或几个氨基酸残基而与SEQ ID NO:2的序列有所不同,但仍具有相同酶活性的酶的氨基酸酸序列;1,3‑丙二醇氧化还原酶突变酶基因具有SEQ ID NO:3的序列,或者是SEQ ID NO:3的简并性序列,或者是所编码的序列因取代、缺失、插入和/或添加一个或几个氨基酸残基而与SEQ ID NO:3所编码序列有所不同,但仍具有相同酶活性的酶的核苷酸序列 所使用的启动子是组成型启动子或者可诱导型启动子,组成型启动子选自蛋白激酶启动子、固氮启动子或二羟丙酮启动子,可诱导型启动子选自乳糖启动子、噬菌体启动子、乳糖和色氨酸的杂合启动子或色氨酸启动子;所使用的重组载体的载体骨架选自pBR322、pUC18、pET系列或pDK系列载体;所使用的宿主细胞选自克雷伯氏菌属、柠檬酸菌属或梭菌属;发酵方式采用批式发酵、批式流加发酵或连续发酵;种子及发酵培养基中含有碳源、氮源、无机盐和维生素;发酵是在微生物培养过程中通入空气进行的有氧发酵、微氧发酵或者在微生物培养过程中通入氮气进行的厌氧发酵;发酵接种量1~12%,培养温度20~50℃,发酵时通气量为0.1~1.0vvm,调节pH维持在5.0~9.0,搅拌转速为80~350rpm。 |