主权项 |
一种以叶片为外植体的光叶蔷薇植株的再生方法,其特征在于经过下列各步骤:(1)将光叶蔷薇的健壮幼嫩枝条灭菌后切成单芽茎段,接种于下列培养基上:MS基本培养基+1.0mg/L6‑BA+0.1mg/LNAA+6.5g/L琼脂+30g/L蔗糖,pH=5.8~6.0,于24士2℃,光照强度为1500~2000lx,光照时间为16h/d的条件下,继代培养2‑4周,得到光叶蔷薇的无菌苗;(2)切取步骤(1)所得光叶蔷薇无菌苗的顶生幼嫩小叶,将其接种于下列诱导培养基上:MS基本培养基+5.0~9.0mg/Lα‑萘乙酸+30.0g/L葡萄糖+2.5g/L植物凝胶,pH=5.8~6.0,并将叶背朝向培养基,在24士2℃的黑暗条件下,培养至诱导出胚性愈伤组织;(3)将步骤(2)得到的胚性愈伤组织接种到下列增殖分化培养基上:MS基本培养基+3.0~6.0mg/L N‑苯基‑N’‑1,2,3‑噻重氮‑5‑基脲+30g/L葡萄糖+2.5g/L植物凝胶,pH=5.8~6.0,先在24士2℃的黑暗条件下培养10~11天,然后在24士2℃、光照强度为1500~2000lx、光照时间为16h/d的条件下,培养至分化出不定芽;(4)切下步骤(3)得到的不定芽,接种到下列成苗培养基上:MS基本培养基+0.1~1.0mg/L 6‑苄基腺嘌呤+0.01~0.1mg/Lα‑萘乙酸+30.0g/L蔗糖+6.5g/L琼脂粉,pH=5.8~6.0,在温度为24士2℃、光照强度为1500~2000lx、光照时间为16h/d的条件下,培养至不定芽再生出植株;(5)将步骤(4)得到的植株接种到下列生根培养基上:1/2MS基本培养基+0.01mg/Lα‑萘乙酸+30.0g/L蔗糖+6.5g/L琼脂粉,pH=5.8~6.0,在温度为24士2℃、光照强度为1500~2000lx、光照时间为16h/d的条件下,进行生根培养,直至培养出完整的植株。 |