发明名称 以叶片为外植体的光叶蔷薇植株的再生方法
摘要 本发明涉及一种以叶片为外植体的光叶蔷薇植株的再生方法,先在继代培养基上培养出无菌苗,再在诱导培养基上培养愈伤组织,又在增殖分化培养基上培养分化出不定芽,在成苗培养基上培养再生出植株,最后在生根培养基上培养得到完整的植株。本发明的方法具有外植体来源广泛、取材方便等优点。所得到的胚性愈伤组织可以作为农杆菌介导的遗传转化的良好受体,可用于光叶蔷薇遗传转化的研究。本发明还涉及用于该方法的培养基组成。
申请公布号 CN103004600A 申请公布日期 2013.04.03
申请号 CN201210561942.8 申请日期 2012.12.22
申请人 云南省农业科学院花卉研究所 发明人 吕经娟;唐开学;李淑斌;蹇洪英;晏慧君;周宁宁;张颢
分类号 A01H4/00(2006.01)I 主分类号 A01H4/00(2006.01)I
代理机构 昆明正原专利商标代理有限公司 53100 代理人 徐玲菊
主权项 一种以叶片为外植体的光叶蔷薇植株的再生方法,其特征在于经过下列各步骤:(1)将光叶蔷薇的健壮幼嫩枝条灭菌后切成单芽茎段,接种于下列培养基上:MS基本培养基+1.0mg/L6‑BA+0.1mg/LNAA+6.5g/L琼脂+30g/L蔗糖,pH=5.8~6.0,于24士2℃,光照强度为1500~2000lx,光照时间为16h/d的条件下,继代培养2‑4周,得到光叶蔷薇的无菌苗;(2)切取步骤(1)所得光叶蔷薇无菌苗的顶生幼嫩小叶,将其接种于下列诱导培养基上:MS基本培养基+5.0~9.0mg/Lα‑萘乙酸+30.0g/L葡萄糖+2.5g/L植物凝胶,pH=5.8~6.0,并将叶背朝向培养基,在24士2℃的黑暗条件下,培养至诱导出胚性愈伤组织;(3)将步骤(2)得到的胚性愈伤组织接种到下列增殖分化培养基上:MS基本培养基+3.0~6.0mg/L N‑苯基‑N’‑1,2,3‑噻重氮‑5‑基脲+30g/L葡萄糖+2.5g/L植物凝胶,pH=5.8~6.0,先在24士2℃的黑暗条件下培养10~11天,然后在24士2℃、光照强度为1500~2000lx、光照时间为16h/d的条件下,培养至分化出不定芽;(4)切下步骤(3)得到的不定芽,接种到下列成苗培养基上:MS基本培养基+0.1~1.0mg/L 6‑苄基腺嘌呤+0.01~0.1mg/Lα‑萘乙酸+30.0g/L蔗糖+6.5g/L琼脂粉,pH=5.8~6.0,在温度为24士2℃、光照强度为1500~2000lx、光照时间为16h/d的条件下,培养至不定芽再生出植株;(5)将步骤(4)得到的植株接种到下列生根培养基上:1/2MS基本培养基+0.01mg/Lα‑萘乙酸+30.0g/L蔗糖+6.5g/L琼脂粉,pH=5.8~6.0,在温度为24士2℃、光照强度为1500~2000lx、光照时间为16h/d的条件下,进行生根培养,直至培养出完整的植株。
地址 650205 云南省昆明市北郊龙头街桃园村