主权项 |
一种通过花药培养获得百脉根再生植株的方法,包括外植体的准备、愈伤组织的诱导、愈伤组织的分化培养、芽生根的步骤,其特征在于:a.外植体的准备:选单核靠边期的花药灭菌处理备用;b.愈伤组织的诱导:无菌环境下剥出花药,接种于愈伤组织诱导培养基上,该培养基的配方为NB+2,4‑D 0.5 mg/L+NAA 0.3 mg/L +KT 2.0 mg/L,蔗糖90 g/L,琼脂6 g/L,pH 5.8;接种密度为40‑50个/皿,用封口膜封口后,放置于生化培养箱25 ℃暗培养至长出愈伤组织,然后利用NB+NAA 0.3 mg/L + 2,4‑D 0.3 mg/L,蔗糖30 g/L,琼脂6 g/L,pH 5.8继代培养,培养条件:温度25±2 ℃,16 h光照、8 h黑暗,湿度50‑70 %,光照强度1500‑2000 lx;c. 愈伤组织的分化培养:将愈伤组织继代2‑3次,每次15 d;然后转入愈伤组织分化培养基,诱导芽的分化;分化培养基的配方为MS+ KT 1.5 mg/L+ NAA 0.5 mg/L,蔗糖30 g/L,琼脂6 g/L,pH 5.8;培养条件:温度25±2 ℃,16 h光照、8 h黑暗,湿度50‑70%,光照强度2000‑2500 lx;d.生根培养:分化培养30 d后,将产生的不定芽转入MS基本培养基进行不定芽复壮培养;不定芽长至2‑3 cm时转入1/2 MS+0.5 mg/L NAA,蔗糖10 g/L,琼脂6 g/L,pH 5.8的培养基进行生根培养;培养条件为:温度25±2 ℃,16 h光照、8 h黑暗,湿度50‑70 %,光照强度2500‑3000 lx。 |