脑蛋白水解物片的检测方法

摘要

本发明提供了一种脑蛋白水解物片的检测方法。本发明方法包括对脑蛋白水解物片中小分子肽类的鉴别和含量测定等步骤。本发明方法通过对样品进行完全的酸水解，测定脑蛋白水解物片中的氨基酸总量，并对脑蛋白水解物片中所含游离氨基酸进行含量测定，制定了针对小分子肽类的合理的质量控制指标，完善了脑蛋白水解物片的检测方法，为脑蛋白水解物片提供了全面、准确的质量控制方法。保证了该产品中有效成分的含量可控性，使制剂各组分达到有效剂量范围，从而保证疗效。适应于工业化生产的质量控制，有较大的应用价值。

主权项

1.脑蛋白水解物片的检测方法，其特征在于，该方法包括下列步骤：(1)鉴别脑蛋白水解物片中所含小分子肽类：采用高效液相法，取脑蛋白水解物片适量，研细，加水10ml溶解，滤过，取滤液作为供试品溶液，以脑蛋白水解物对照溶液为对照品；色谱柱用TSK GEL 2000 SWxl型凝胶色谱柱，取磷酸氢二钾10.63g与磷酸二氢钾5.31g，加异丙醇50ml，加水至800ml，用磷酸调节pH至7.0，加水稀释至1000ml为流动相，检测波长为280nm，鉴别脑蛋白水解物片中所含小分子肽类；(2)测定脑蛋白水解物片中的多肽含量：采用高效液相法，以天门冬氨酸、谷氨酸、丝氨酸、组氨酸、甘氨酸、精氨酸、苏氨酸、丙氨酸、脯氨酸、缬氨酸、蛋氨酸、赖氨酸盐酸盐、异亮氨酸、亮氨酸、苯丙氨酸、色氨酸16种氨基酸为对照品，D-正亮氨酸为内标物，配制适当浓度的对照品溶液及内标溶液；流动相A：取乙酸钠19.05g,加1000ml水溶解，用磷酸调pH为5.00，流动相B：60%乙腈，梯度洗脱，检测波长为248nm；通过内标法精密测定脑蛋白水解物片水解后氨基酸总量及脑蛋白水解物片中游离的氨基酸含量；所述测定脑蛋白水解物片中的多肽含量包括下列步骤：i、色谱柱用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，流动相A：取乙酸钠19.05g,加1000ml水溶解，用磷酸调pH为5.00，流动相B：60%乙腈，梯度洗脱，柱温为37.0℃,检测波长：248nm；ii、水解氨基酸含量测定：取脑蛋白水解物片20片，研细，精密称取适量，置硬质安瓿中，加内标溶液1ml和盐酸2ml，摇匀，充氮封口，110℃水解20小时，放冷，启封，置蒸发皿中，水浴蒸干，加水稀释至100ml，作为水解氨基酸供试品溶液，衍生后进样；iii、游离氨基酸含量测定：取脑蛋白水解物片20片，研细，精密称取适量，置100ml量瓶中，加1mol/L盐酸溶液1ml和内标溶液1ml，加水稀释至刻度，滤过，作为游离氨基酸供试品溶液，衍生后进样。