一种黄腐酚和黄酮类化合物的萃取分离方法

摘要

本发明涉及一种黄腐酚和黄酮类化合物的萃取分离方法，步骤如下：用乙醇的溶液浸提酒花及其超临界CO2萃余物，使其中黄酮类化合物尤其是黄腐酚充分溶出；浸提后过滤得滤液，将其减压蒸馏得浓缩液；将浓缩液离心后，取上清液，用0.45μL有机膜过滤，除去部分杂质，用洗脱剂将黄酮类化合物从大孔吸附树脂上洗脱下来，收集流出液，浓缩，冷冻干燥，得黄色粉末。本发明的原料为酒花及其超临界CO2萃余物等，尤其是将酒花制品加工过程中的废料-超临界CO2酒花浸膏萃余物作为主要原料，不但将有主要功效且难以分离的黄腐酚单独提取出来，而且将酒花废料富含的其他黄酮类化合物也一并提取出来，对不能用于啤酒酿造中的酒花也提供了一种开发途径，提高酒花资源利用率和附加值，延长酒花产业链具有重要意义。

主权项

一种黄腐酚的萃取分离方法，其特征在于：步骤如下：⑴酒花及其超临界CO2萃余物的提取：称取50g酒花及其超临界CO2萃余物原料，加入到1000mL的30%‑60%的乙醇溶液中，在70℃水浴中搅拌下加热90min，冷却、0.45µL有机膜抽滤；按上述步骤再提取一次，合并滤液，用旋转蒸发仪浓缩；⑵除杂质：将浓缩液在3500r/min下离心10min，取上层溶液；将上层溶液按照上述步骤，再次离心，取上层溶液，经0.45µL膜过滤，滤液用旋转蒸发仪浓缩；⑶装柱：取50‑150g大孔吸附树脂，将其浸泡在95%的乙醇溶液中，搅拌，使其充分溶胀，在层析柱底部预先放入脱脂棉，加入20mL蒸馏水，将溶胀的大孔吸附度树脂缓慢倾入，待其自然沉降完全；其中，所述大孔吸附树脂为非极性树脂X‑5、非极性树脂ADS‑8、弱极性树脂AB‑8、中极性树脂ADS‑17或极性较大树脂ADS‑F8；                                                       ⑷洗脱：将大孔吸附树脂中多余的水排出，直到接近液面1cm，将5mL 0.3g/mL浓度的样品，用滴管滴加到柱内，先用水洗脱，再用50%‑100%的溶剂体系作为洗脱剂洗脱，流速为1‑2 mL/min，主要采用50%‑70%‑100%三个梯度的乙醇溶液，所有量为柱体积的2‑4倍；其中，所述浓度指的是酒花粗提物粉末和水溶液液体的比例，即g/ml；⑸收集：每5mL收集一管，每管样品先用全波长扫描确认是否含有黄腐酚，若无再定性确定是否为黄酮类化合物，合并滤液，真空蒸馏并回收有机试剂，浓缩后的水溶液经冷冻干燥，得到黄色具有特殊香味的黄腐酚和黄酮类化合物粉末；用液相色谱检测黄腐酚组分，计算黄腐酚纯度为91.3%；用亚硝酸钠‑硝酸铝法检测总黄酮的含量，计算黄酮类化合物纯度为33.6%；其中，所述黄酮类化合物主要包括槲皮素、山奈酚及其芦丁等。