基于全爪螨几丁质基因的双靶标转基因载体的制备方法

摘要

本发明公开了一种同时应用2种几丁质酶基因的方法。从柑橘全爪螨转录组数据库鉴定出2条几丁质酶基因Unigene10731和Unigene7021，进行真实性检测后，将选出的两个基因在NCBI上进行比对，找出保守序列，根据多基因大片段构建策略将两个基因拼接成一个多基因片段，将Unigene10731与Unigene7021拼接在一起作为一个多基因。设计含有酶切位点的引物，将正、反向多基因几丁质酶目的片段先后插入到载体内含子两端，从而构成反向互补发卡结构的RNAi干扰载体“PFGC+Ug10731/Ug7021”，将载体转载于农杆菌中对柑橘苗木进行侵染。

主权项

一种基于柑橘全爪螨几丁质基因的双靶标转基因载体的制备方法，其特征在于，该制备方法首先从柑橘全爪螨转录组数据库鉴定出2条几丁质酶基因Unigene10731和Unigene7021，进行真实性检测后，将选出的两个基因在NCBI上进行比对，找出保守序列，根据多基因大片段构建策略将两个基因拼接成一个多基因片段，将Unigene10731与Unigene7021拼接在一起作为一个多基因；设计含有酶切位点的引物，将正、反向多基因几丁质酶目的片段先后插入到载体内含子两端，从而构成反向互补发卡结构的RNAi干扰载体“PFGC+Ug10731/Ug7021”，将载体转载于农杆菌中对柑橘苗木进行侵染。