(R)-4-氰基-3-羟基丁酸乙酯的生物制备方法

摘要

一种(R)-4-氰基-3-羟基丁酸乙酯的生物制备方法，其以(S)-4-氯-3-羟基丁酸乙酯为底物，该底物在生物催化剂的作用下，与氰化钠反应生成目标产物(R)-4-氰基-3-羟基丁酸乙酯，所述的生物催化剂为重组卤代醇脱卤酶，所述的反应在pH为6-8的水相中进行。本发明通过采用重组卤代醇脱卤酶，使得底物浓度提高，酶用量降低，从而降低了生产成本，并且本发明通过对工艺的优化，使得产品的纯度和收率都有所提高。

主权项

一种(R)‑4‑氰基‑3‑羟基丁酸乙酯的生物制备方法，其以(S)‑4‑氯‑3‑羟基丁酸乙酯为底物，该底物在生物催化剂的作用下，与氰化钠反应生成目标产物(R)‑4‑氰基‑3‑羟基丁酸乙酯，其特征在于：所述的生物催化剂为重组卤代醇脱卤酶，所述的重组卤代醇脱卤酶的制备方法为：将卤代醇脱卤酶单菌落接种到含氨苄青霉素抗性的液体LB培养基中，于30‑40℃下摇床活化8‑12小时，将活化后得到的培养物转接到含氨苄青霉素抗性的液体LB培养基中，于30‑40℃下扩大培养至OD600值达到0.6‑0.8，加入诱导剂，于25‑35℃继续培养8‑12小时，离心收集沉淀物，加入磷酸盐缓冲液得悬浮液，将悬浮液置于冰浴中超声波破碎8‑12分钟，再离心，分离上清液，将上清液预冻至温度为‑10~‑25℃，然后再冻干24‑48小时，即得重组卤代醇脱卤酶，所述的反应在pH为6‑8的水相中进行。