水稻基因BADH2的定点敲除系统及其应用

摘要

本发明公开了水稻基因BADH2的定点敲除系统及其应用。所述定点敲除系统为如下a）或b）或c）：a）由T-BADH2b和T-BADH2a组成；b）T-BADH2b；c）T-BADH2a；所述T-BADH2b和T-BADH2a均为特异剪切所述水稻基因BADH2的转录激活子样效应因子核酸酶，二者的靶序列分别为序列表序列1的第1589位至第1640位的核苷酸序列和第273位至第324位的核苷酸序列。实验证明，单独使用T-BADH2b对水稻基因BADH2的突变频率为26.9%；单独使用T-BADH2a对水稻基因BADH2的突变频率为9.2%；同时T-BADH2b和T-BADH2a同时在水稻日本晴愈伤组织中表达获得的抗性愈伤中水稻基因BADH2的突变频率为18.1%，其中大片段删除的发生频率为5.1%。本发明为创制香米种质资源、培育优良香米品种提供了一种高效的育种方式。

主权项

水稻基因BADH2的定点敲除系统，为如下a）或b）或c）：a）由T‑BADH2b和T‑BADH2a组成；b）T‑BADH2b；c）T‑BADH2a；所述T‑BADH2b为特异剪切所述水稻基因BADH2内靶序列B的转录激活子样效应因子核酸酶；所述靶序列B由间隔序列b、位于所述间隔序列b 5’端的转录激活子样效应因子核酸酶的模块识别序列L‑b和位于所述间隔序列b 3’端的转录激活子样效应因子核酸酶的模块识别序列R‑b组成；所述间隔序列b为水稻基因BADH2中包含序列表序列1第1612位至第1617位的长为15—20的序列；所述模块识别序列L‑b的长为15—30bp，所述模块识别序列R‑b的长为15—30bp；所述T‑BADH2a为特异剪切所述水稻基因BADH2内靶序列A的转录激活子样效应因子核酸酶；所述靶序列A由间隔序列a、位于所述间隔序列a 5’端的转录激活子样效应因子核酸酶的模块识别序列L‑a和位于所述间隔序列a 3’端的转录激活子样效应因子核酸酶的模块识别序列R‑a组成；所述间隔序列a为水稻基因BADH2中包含序列表序列1第298位至第303位的长为15—20bp的序列；所述模块识别序列L‑a的长为15—30bp，所述模块识别序列R‑a的长为15—30bp。