氨肽酶及其高产菌的高通量筛选方法

摘要

本发明公开了氨肽酶及其高产菌的高通量筛选方法，涉及一种氨肽酶及其高产微生物菌株的高通量筛选方法。将单菌落接种于装有液体种子培养基的深孔板I的孔中，摇床培养，将深孔板I深孔中的种子液对应地接种到装有发酵培养基的深孔板II对应的深孔中，摇床培养，将深孔板II离心，上清液为粗酶液。在酶标板的微孔中加入缓冲液和显色底物溶液或荧光底物溶液，再加入稀释的待测粗酶液，于30～70℃水浴反应10～30min，反应结束时立即加入30～50％乙酸溶液并终止反应。采用酶标仪测定反应液的吸光度或荧光强度，根据标准曲线和粗酶液的稀释倍数计算酶活。本发明实现了高通量培养、粗酶液的高通量制备及酶活的高通量测定的目标。

主权项

氨肽酶及其高产菌的高通量筛选方法，包括如下步骤：挑取氨肽酶产生菌的单菌落，接种于装有液体种子培养基的深孔板I的孔中，盖上深孔板的盖子，于30～40℃、180～300rpm摇床培养4～10h；将深孔板I中的种子液对应地接种到装有发酵培养基的深孔板II中，于30～40℃、180～300rpm摇床培养16～48h；将深孔板II放置于孔板离心机，5000～10000×g离心5～30min；深孔板II的深孔中的上清液为粗酶液；以微量化梯度稀释法将粗酶液适当稀释；用酶标板法测定粗酶液的酶活，在酶标板的微孔中加入缓冲液和显色底物溶液或荧光底物溶液，加入稀释的待测粗酶液，以蒸馏水作空白对照，于30～70℃水浴反应10～30min，反应结束立即加入30～50%乙酸溶液终止反应；采用酶标仪测定反应液的吸光度或荧光强度，根据标准曲线和粗酶液的稀释倍数计算酶活；根据酶活测定结果，选择对应的菌株进行摇瓶复筛，获得氨肽酶高产菌株。