大规模制备注射用中期因子反义寡核苷酸纳米脂质体的方法

摘要

大规模制备注射用中期因子反义寡核苷酸纳米脂质体的方法，本发明将阳离子脂质和磷脂的脂质混合物溶解于有机溶剂中，得到脂质溶液，然后用超声仪对脂质体进行初步分散，并通过超滤除去有机溶剂，最后在高压下用挤压器挤压统一粒径，得到空白的纳米脂质体；然后和MK-ASODN溶液混合得到MK-ASODN纳米脂质体，根据本发明生产的注射用中期因子反义寡核苷酸纳米脂质体，粒径在100～500nm之间，性质稳定，抗肝癌作用显著增强。本工艺过程简单，容易实现，且非常容易放大，适合于工业化生产。

主权项

一种大规模制备注射用中期因子反义寡核苷酸纳米脂质体的方法，其特征在于该方法包括以下步骤： （1）制备脂质溶液：该脂质溶液是由包含二油酰磷脂酰乙醇胺（DOPE）和3‑β‑[N‑（N’,N’‑二甲基氨基乙基）]氨甲酰基胆固醇（DC‑Chol）的原料溶解到有机溶剂中，搅拌至溶液澄清透明，有机溶剂的用量使阳离子脂质和磷脂恰好完全溶解，得脂质溶液，溶液温度为20~60℃，上述原料摩尔百分比组成为：二油酰磷脂酰乙醇胺（DOPE）5‑95%、3‑β‑[N‑（N’,N’‑二甲基氨基乙基）]氨甲酰基胆固醇（DC‑Chol）95‑5%；（2）采用交叉流技术使脂质溶液与水化溶剂按体积比1：50～3：17混合，混合后得到的粗脂质体通过超声仪超声，初步分散，通过施压将脂质体通过铺有聚碳酸脂膜的挤压器统一粒径；（3）流出的脂质体混悬液通过超滤器超滤，除去有机溶剂，超滤时连续补充脂质体水化溶剂，得到空白的纳米脂质体，制成的纳米脂质体过滤除菌分装后备用或添加冻干保护剂后冻干，液体于在2‑8℃保存，冻干品于‑20℃以下保存；（4）将中期因子反义寡核苷酸（MK‑ASODN）按照溶解在水化溶剂中，得MK‑ASODN溶液，将步骤（3）得到脂质体溶液和MK‑ASODN溶液按照电荷比1：1～5：1混合或是直接将MK‑ASODN溶液加入纳米脂质体冻干品混合得到MK‑ASODN纳米脂质体，其中MK‑ASODN的序列为CCCCGGGCCGCCCTTCTTCA。