在真细菌宿主细胞内表达正交翻译组分的系统

摘要

本发明涉及体内产生包含一个或多个非天然氨基酸的多肽的组合物和方法。具体地说，本发明提供用于多肽的有效真细菌表达的质粒系统，所述多肽在基因编程(genetically-programmed)位置包含一个或多个非天然氨基酸。

主权项

一种包含以下核酸构建物（a）和（b）的用于共表达O‑tRNA和O‑RS的组合物：(a)具有衍生自大肠杆菌脯氨酸tRNA基因的启动子和终止子核苷酸序列和可表达核苷酸序列的构建物A，其中所述启动子和终止子序列均操作性连接于所述可表达核苷酸序列，并且其中所述可表达核苷酸序列是所述启动子和终止子核苷酸序列的异源序列，且所述可表达核苷酸序列编码所述O‑tRNA；和(b)具有启动子核苷酸序列和可表达核苷酸序列的构建物B，所述启动子核苷酸序列是如SEQ ID NO:13的核苷酸序列所示的经修饰大肠杆菌glnS启动子，其中所述经修饰大肠杆菌glnS启动子核苷酸序列操作性连接于所述可表达核苷酸序列，所述可表达核苷酸序列编码所述O‑RS，且其中所述O‑RS用非天然氨基酸优先氨酰化相应的O‑tRNA；其中，所述（a）和（b）含有任选的（d）的可表达核苷酸序列，其中：(d)构建物D是多顺反子操纵子，所述操纵子包含多条tRNA基因核苷酸序列，其中至少一个tRNA基因通过异源多核苷酸接头与至少一个毗邻tRNA基因相隔开，所述异源多核苷酸接头衍生自天然tRNA操纵子的天然多核苷酸接头。