用于小麦白粉病抗病基因PmHNK辅助选择的分子标记及其用法

摘要

本发明涉及利用小麦白粉病抗病新基因PmHNK紧密连锁的分子标记进行辅助育种以提高小麦抗白粉病育种的效率中的应用。本发明的分子标记中扩增该分子标记为xgwm299、标记xwmc291，xgwm299与基因PmHNK的遗传距离为5.3cM，标记xwmc291与PmHNK的遗传距离为3.8cM。将所述的分子标记用于SSR标记筛选，通过PCR反应进行扩增，扩增产物聚丙烯酰胺凝胶电泳，硝酸银染色后观察照相。本发明首次定位了PmHNK基因，两个标记均与PmHNK基因紧密连锁，可用于该基因的分子标记辅助育种。利用本发明的白粉病分子标记辅助育种选择目标明确，节约成本，还可大幅度地提高选择效率，为将来通过染色体步移的途径对PmHNK进行图位克隆成为可能，为白粉病抗病育种提供新的抗源和技术基础。

主权项

一种用于小麦白粉病抗病基因PmHNK辅助选择的分子标记的用法，其特征在于：所述分子标记为与小麦白粉病抗性基因PmHNK的遗传距离为5.3cM的标记xgwm299，扩增该分子标记的引物的核苷酸序列如下：P1：5’‑ACTACTTAGGCCTCCCGCC‑3’，P2：5’‑TGACCCACTTGCAATTCATC‑3’；将所述分子标记用于SSR标记筛选时的反应程序为：(1)PCR反应体系为10μL，含10×buffer 1μL、15mmol/L MgCl2 1μL、2mmol/L dNTP 1μL、20ng/μL分子标记引物1μL、1U Taq酶、去离子水3.875μL、20ng/μL基因组DNA 2μL；(2)扩增程序为：94℃预变性3min；94℃变性1min，55℃退火1min，72℃延伸2min，40个循环；72℃延伸10min；(3)扩增产物用6％变性聚丙烯酰胺凝胶或8％非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳，硝酸银染色后观察照相。