发明名称 |
一种Thermus脂肪酶的固定化方法 |
摘要 |
本发明公开了一种Thermus脂肪酶的固定化方法:将氨基化纳米磁性载体Fe3O4/SiO2与pH8.0的缓冲溶液混合,加入质量浓度25%的戊二醛水溶液,室温下磁力搅拌4h,再加入以所述Tris-HCl缓冲溶液溶解的Thermus脂肪酶(Thermus thermophilus WL)的缓冲溶液,室温下磁力搅拌3.5h,磁分离,弃去上清液a,将沉淀a用缓冲溶液洗涤,冷冻干燥,获得固定化的Thermus脂肪酶;本发明所述固定化Thermus脂肪酶耐热范围40-100℃,pH值适应范围4.0-9.0,对金属离子,酶抑制剂及去污剂有较强的耐受性;具有极好的超顺磁性,易磁分离回收,较好的操作稳定性。 |
申请公布号 |
CN102994491A |
申请公布日期 |
2013.03.27 |
申请号 |
CN201210241464.2 |
申请日期 |
2012.07.12 |
申请人 |
浙江大学 |
发明人 |
章晓波;宋崇富 |
分类号 |
C12N11/14(2006.01)I;C12N9/20(2006.01)I;C12N1/21(2006.01)I;C12R1/19(2006.01)N |
主分类号 |
C12N11/14(2006.01)I |
代理机构 |
杭州天正专利事务所有限公司 33201 |
代理人 |
黄美娟;王兵 |
主权项 |
一种Thermus脂肪酶的固定化方法,其特征在于所述方法为:将氨基化纳米磁性载体Fe3O4/SiO2与pH8.0的缓冲溶液混合,加入质量浓度25%的戊二醛水溶液,室温下磁力搅拌4h,再加入以所述Tris‑HCl缓冲溶液溶解的Thermus脂肪酶(Thermus thermophilus WL)的缓冲溶液,室温下磁力搅拌3.5h,磁分离,弃去上清液a,将沉淀a用缓冲溶液洗涤,冷冻干燥,获得固定化的Thermus脂肪酶;所述Thermus脂肪酶按下述方法获得:将序列号为AAS81965.1的Thermus脂肪酶基因以大肠埃希氏杆菌为宿主细胞进行重组,获得含有Thermus脂肪酶基因的大肠埃希氏杆菌CGMCC NO:1.12252;将含有Thermus脂肪酶基因的大肠埃希氏杆菌CGMCC NO:1.12252的单菌落接种于LB液体培养基中,37℃、250rpm培养4h,获得培养液a,取培养液a以体积分数1%的接种量接种于新鲜LB液体培养基中,37℃、250rpm培养3h,获得培养液b,在培养液b中加入异丙基‑β‑D‑硫代吡喃半乳糖苷至终浓度为0.5mM,37℃下培养4h,离心,将沉淀b加入pH7.9的Buffer A缓冲液中,在10KHz频率下进行超声裂解,离心,取上清液b进行Ni柱亲和层析,洗脱液经透析后,取截留液冷冻干燥,获得所述Thermus脂肪酶。 |
地址 |
310027 浙江省杭州市西湖区浙大路38号 |