一种霍山石斛种苗繁殖方法

摘要

本发明涉及一种霍山石斛种苗的繁殖方法，本方法包括外植体的获取、无菌播种、原球茎诱导、人工授粉、壮苗培养及试管苗移栽各步骤。选取生长健壮的开花的霍山石斛株作为母株，通过人工授粉获得果实，再从成熟的果实中取出种子，用种子萌发培养基培养，使种子萌发成原球茎并进一步形成小苗，再将小苗用试管开花培养基培养，开花后在无菌条件下进行人工授粉，从成熟的果实中取出种子进行无菌播种，使种子长成小植株，形成可出瓶种植的种苗，进一步将种苗出瓶移栽，即可。本发明操作简单，成本低廉，缩短霍山石斛果实的成熟期，高效、无病虫害，能终年生产霍山石斛种子，成苗的移栽成活率可达96%以上，为霍山石斛种苗的繁殖开辟了一条新的途径。

主权项

1.一种霍山石斛种苗繁殖方法，其特征在于，包括以下的工艺步骤：(1) 外植体获取：在人工种植的霍山石斛开花时，选取生长健壮的母株进行人工授粉，并将人工授粉而来的成熟果实作为外植体；(2) 原球茎诱导：将外植体依次用酒精浸泡28-32 秒，质量分数0.2%的升汞溶液消毒25-35 分钟，无菌水漂洗4-5次后切开，将胚接种到种子萌发培养基KnP1上萌发成原球茎， 并进一步分化成小苗；(3) 人工授粉：将步骤（2）分化出的小苗转移到试管开花培养基KnP2上培养，待开花后，选取生长健壮的开花株在无菌条件下进行人工授粉； (4)无菌播种：果实成熟后切开进行无菌播种，种子萌发形成原球茎，并进一步形成完整的小植株；(5)壮苗培养:将小植株转移到玻璃瓶壮苗培养基KnP3上培养，形成成苗； (6) 玻璃瓶苗出瓶移栽：将栽有成苗的玻璃瓶转移到自然光下炼苗8-12 天，光照度1500～2000lx, 光照9-12小时/天,然后将成苗从玻璃瓶中取出，洗净根部的培养基，在木屑的基质中栽培，保持适当通风和足够的湿度；上述步骤中培养基组分及含量配比如下：种子萌发培养基KnP1：试管开花培养基KnP2:KnP1培养基6-BA        1.0 mg/LNAA         0.1 mg/L；壮苗培养基KnP3：MS或B5培养基 6-BA        0.4-0.6 mg/LNAA         0.8-1.2 mg/L；上述步骤中所有的培养基pH 5.1～5.4，培养温度（26±2）℃。