一种培养扩增人类毛囊干细胞及重编程为诱导多能干细胞的方法

摘要

本发明涉及一种培养扩增人类毛囊干细胞及重编程为诱导多能干细胞的方法，其具体步骤为：将准备拔取毛发的部位贴根部剪去至仅留0.2-0.3cm左右毛发根，75％酒精消毒10min；漂洗；将单根毛发种入培养皿中，采用毛囊干细胞培养基培养；1周后每3-4天换液一次；E、逆转录病毒包装；诱导毛囊干细胞重编程为iPS细胞；毛囊干细胞来源的iPS细胞维持培养及鉴定。本发明过程简单；无需蛋白酶消化成单细胞；扩增的毛囊干细胞中β-整合素和角蛋白-19阳性率达90％以上；为皮肤缺损的快速修复、毛囊干细胞的生长与发生的分子机理研究、表观遗传学研究和重编程为诱导多能干细胞提供充足的种子细胞来源。

主权项

一种培养扩增人类毛囊干细胞及重编程为诱导多能干细胞的方法，其特征在于，其具体步骤为：A、将准备拔取毛发的部位贴根部剪去至仅留0.2‑0.3cm左右毛发根，75％酒精消毒10min；B、用清洁眉镊快速将发根拔出，并快速置入无菌的PBS中漂洗；C、将单根毛发种入培养皿中，采用毛囊干细胞培养基培养；D、每天观察毛发的生长情况，1周后每3‑4天换液一次；E、逆转录病毒包装：采用试剂Fugene6和PLAT A细胞进行逆转录病毒的包装，分别利用pMX‑hOct4、pMX‑hSox2、pMX‑hKlf4和pMX‑hc‑Myc包装出四种逆转录病毒；F、通过逆转录病毒感染毛囊干细胞，促使其表达外源的人类Oct4、Sox2、Klf4和c‑Myc基因，诱导毛囊干细胞重编程为iPS细胞；