一种用Bac-to-Bac系统表达TAT-凋亡素融合蛋白的方法

摘要

本发明涉及一种TAT-凋亡素融合蛋白的方法，具体涉及一种用Bac-to-Bac系统表达TAT-凋亡素融合蛋白的方法。TAT-凋亡素基因亚克隆至Bac-to-Bac杆状病毒表达系统的供体质粒pFastBacHTb的多克隆位点中，转化入含有家蚕杆状病毒Bacmid基因组的感受态细菌DH10BmBac细胞内，蓝白斑筛选获得阳性克隆，从阳性克隆中抽提质粒DNA，用此所获得的重组杆状病毒DNA转染家蚕细胞BmN，获得含有TAT-凋亡素基因的重组杆状病毒，再用收集到的重组杆状病毒大量感染BmN细胞，最终大量表达TAT-凋亡素融合蛋白，本发明用家蚕细胞表达的重组TAT-凋亡素融合蛋白，具有较高的表达量及生物活性，为利用家蚕生物反应器生产大量该蛋白打下基础。

主权项

一种用Bac‑to‑Bac系统表达TAT‑凋亡素融合蛋白的方法，其特征在于：i.将TAT‑凋亡素基因从pUC57‑TAT‑凋亡素中亚克隆至Bac‑to‑Bac杆状病毒表达系统的供体质粒pFastBacHTb的多克隆位点中，ii.将该质粒转化入含有家蚕杆状病毒Bacmid基因组的感受态细菌DH10BmBac细胞内，在含有抗生素的培养板上过夜培养，蓝白斑筛选获得阳性克隆，从阳性克隆中抽提质粒DNA，iii.用此所获得的重组杆状病毒DNA转染家蚕细胞BmN，72h后分离培养基上清液，获得含有TAT‑凋亡素基因的重组杆状病毒，iv.再用收集到的重组杆状病毒大量感染BmN细胞，最终大量表达TAT‑凋亡素融合蛋白。