一种高通量快速提取真菌基因组DNA的方法

摘要

本发明提供了一种高通量快速提取真菌基因组DNA的方法。所述方法利用真菌菌块或菌丝体，经过简易的物理研磨方法，采用改良的CTAB溶液，经过处理去杂后，可得到纯化的DNA。本发明的有益效果主要体现在：(1)免除了现有方法中必须使用特殊试剂液氮进行研磨的复杂程序，(2)避免了现有方法中使用苯酚等有毒致癌试剂，(3)避免使用有毒难闻的化学试剂β-巯基乙醇，(4)本方法只需要1小时，缩短提取时间2小时，大大加快了实验速度，可实现高通量快速提取。本发明所述方法也可适用于其他各种真菌基因组DNA的快速提取。

主权项

一种高通量快速提取真菌基因组DNA的方法，其特征在于所述方法如下：（1）取1.5mL离心管，加入CTAB缓冲液100μL，从培养基上挑取真菌菌块样品，投入离心管中，用75%酒精消毒过的研磨棒充分研磨菌块；所述CTAB缓冲液组成如下：CTAB 1.5%，NaCl 1.4mol/L，TrisCl 100mmol/L，EDTA 20mmol/L，SDS 1%，PVP 1%，溶剂为去离子水；所述真菌为下列之一：水稻稻曲菌、毕赤氏酵母菌、黑霉菌、平菇、黑木耳；（2）研磨好的样品补加400μL CTAB缓冲液和3～5μl RNase A，置于65℃水浴中，每隔10min轻轻摇动，30min后取出；（3）加入氯仿：异戊醇体积比为24:1的CIA液700μL，振荡混匀1min；（4）移取上层水相于离心管中，加入700μL预冷的异丙醇，颠倒几次使样品混匀，置于‑20℃下20min，使核酸充分沉淀；（5）离心，弃上清，取沉淀吸干水分，即得样品基因组DNA，用TE缓冲液溶解DNA，‑20℃保存DNA样品备用；所述TE缓冲液组成如下：1mol/L TrisCl，0.5mol/L EDTA，pH8.0，溶剂为去离子水。