主权项 |
金银花快速组培繁殖方法,其特征在于该方法包括以下步骤:⑴制备培养基:①用二水氯化钙400mg/L、硝酸钾1900mg/L、硝酸铵250mg/L、磷酸二氢钾170mg/L、硫酸铵220mg/L、硝酸镁320mg/L、磷酸二氢钠40mg/L、七水硫酸亚铁27.8mg/L、乙二胺四乙酸二钠37.3mg/L、六水氯化钴0.025mg/L、五水硫酸铜0.025mg/L、碘化钾0.83mg/L、七水硫酸锌8.6mg/L、硼酸6.2mg/L、四水硫酸锰22.3mg/L、二水钼酸钠0.25mg/L、肌醇100mg/L、盐酸硫胺素0.1mg/L、盐酸吡哆辛0.5mg/L、甘氨酸2mg/L、烟酸0.5mg/L、IBA0.0001mg/L、6‑BA0.0004mg/L、白糖30g/L、卡拉胶6g/L制备pH=5.8的分化和丛生芽培养基;②用二水氯化钙200mg/L、硝酸钾950mg/L、硝酸铵125mg/L、磷酸二氢钾85mg/L、硫酸铵110mg/L、硝酸镁160mg/L、磷酸二氢钠20mg/L、七水硫酸亚铁27.8mg/L、乙二胺四乙酸二钠37.3mg/L、六水氯化钴0.025mg/L、五水硫酸铜0.025mg/L、碘化钾0.83mg/L、七水硫酸锌8.6mg/L、硼酸6.2mg/L、四水硫酸锰22.3mg/L、二水钼酸钠0.25mg/L、肌醇100mg/L、盐酸硫胺素0.1mg/L、盐酸吡哆辛0.5mg/L、甘氨酸2mg/L、烟酸0.5mg/L、IBA0.003mg/L、卡拉胶6g/L、白糖20g/L、活性炭500mg/L制备pH=5.8的生根培养基;③将配制好的各培养基装进灭菌器里灭菌,调节温度达到121℃时,记时灭菌21分钟,灭菌完后,把灭菌好的培养基迅速转移储存起来后待用;⑵金银花外植体的采集:从室外选取健壮、无病虫害带腋芽或顶芽的金银花嫩茎段,剪去叶,留叶柄基部;⑶金银花外植体的消毒:将采集的金银花外植体放入1%浓度的洗衣粉水中冲洗3‑5分钟,再放到浓度为0.1%的升汞液中处理15‑17分钟,同时加入0.1%的链霉素,然后用无菌水清洗4‑5次,彻底除去升汞;⑷诱导和分化培养:接着取出外植体,接种在分化培养基上,每管接种1芽,培养温度25‑28℃,湿度50%,光照强度1500‑3000Lx,光照时间为每天10‑12小时;材料接种15天后,基部产生少量黄白色的愈伤组织,19‑21天逐渐形成丛生芽,24‑26天腋芽长出2‑3cm;⑸增殖培养:待腋芽长出2‑3cm时,再进行分段处理,剪切成长度为2.0‑2.5cm的茎段,将茎段转接至丛生芽增殖培养基上,每瓶培养4‑6芽,培养温度25‑28℃,湿度50%,光照强度1500‑3000Lx,光照时间为每天10‑12小时,经过24‑26天,芽苗长到2.0‑3.0cm,在丛生芽增殖倍率达3‑5倍时,调低培养温度至21℃,每天增加光照时间至12‑14小时;⑹生根培养:选取生长健壮,高达2.5cm的无根小苗,切成单株后接种到生根培养基上,在温度23‑25℃、湿度50%,光照强度1500‑3000Lx,光照时间为每天10‑12小时的环境下培养13‑15天,小苗将长出白色短根,生根率达50%,20天时,生根率达85%。 |