微生物发酵生产低温蛋白酶的方法

摘要

本发明所述的一种微生物发酵生产低温蛋白酶的方法是将产生蛋白酶的微生物逐级低温驯化，使其在低温环境中生长良好；将低温驯化后的蛋白酶产生菌在14～20℃逐级扩大培养，按发酵液体积的3～9％接种量接入产酶培养基中，在14～20℃培养48～120h时，即微生物发酵生产低温蛋白酶结束；发酵液在4,000～8,000rpm离心收集液体，收集的液体即为粗酶液；根据不同需要和使用对象不同，将粗酶液进一步浓缩、分离纯化，制备成不同活性、纯度和剂型的酶制剂。

主权项

一种微生物发酵生产低温蛋白酶的方法，其包括以下步骤：(1) 菌种来源于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，菌种编号：1.504或1.775或1.2172，菌株先活化；将上述产生蛋白酶的微生物逐级低温驯化，驯化温度由高到低，25℃→22℃→20℃→18℃→16℃→14℃，使其在低温环境中生长良好；菌种低温驯化培养基：牛肉膏 0.1%～0.5%， 蛋白胨0.7%～1.2%， NaCl 0.4%～0.6%，琼脂 2%，干酪素 1%～4%，自来水1000ml，pH 7.4，0.1Mpa，121℃灭菌20min；(2)按常规方法将上述低温驯化后的蛋白酶产生菌在14～20℃逐级扩大培养，制备成液体一级种子和二级种子；液体种子培养基: 葡萄糖 0.8%～1.2%，蛋白胨 0.3%～0.7%，酵母膏 0.3%～0.8%，K2HPO4  0.08%～0.12%，MgSO4 0.01%～0.04%，Na2CO3 0.8%～1.2%，pH 8.5，0.1Mpa，121℃灭菌20min；(3)将液体一级种子或二级种子,按发酵液体积的3～9%接种量接入产酶培养基中，在14～20℃培养48～120 h，即微生物发酵生产低温蛋白酶结束；产酶培养基: 葡萄糖 0.9%～1.3%，蛋白胨 0.2%～0.6%，酵母膏 0.3%～0.7%，K2HPO4 0.07%～0.13%，MgSO4 0.01%～0.03%，Na2CO3 0.8%～1.3%，pH 8.5，0.1Mpa，121℃灭菌20min；(4)将(3)的发酵液在4,000～8,000 rpm离心收集液体，收集到的液体即为粗酶液； (5)根据不同需要和使用对象不同，将(4)得到的粗酶液进一步浓缩、分离纯化，制备成不同活性、纯度和剂型的酶制剂。