扩增的核酸方法

摘要

本发明提供一种使用寡核苷酸引物和DNA聚合酶进行核酸扩增的方法。本发明的扩增方法包括：将含有至少一种脱氧核苷三磷酸、至少一种DNA聚合酶、至少两种寡核苷酸引物、以及作为模板的核酸片段的反应溶液进行孵育，以上述引物的3’末端作为起点进行聚合酶反应，从而对该核酸片段进行扩增，其特征在于，将标识序列添加到第一寡核苷酸引物的5’末端，该标识序列为在作为模板的核酸片段中存在的一段碱基序列，在所述模板上，该碱基序列位于该模板中的与第一寡核苷酸引物的3’端部分(第一寡核苷酸与模板核酸退火的部分)基本上相同的序列的3’末端侧。

主权项

一种核酸的扩增方法，其包括：通过将含有至少一种脱氧核苷三磷酸、至少一种DNA聚合酶、至少两种寡核苷酸引物、以及作为模板的核酸片段的反应溶液进行孵育，以上述引物的3’末端作为起点进行聚合酶反应，从而对所述核酸片段进行扩增，其特征在于，将标识序列添加到第一寡核苷酸引物的5’末端，该标识序列为：在作为模板的核酸片段的碱基序列中，在距与第一寡核苷酸引物的3’端部分基本上相同的序列的3’末端100个碱基以内的区域中所存在的碱基序列，其中所述的第一寡核苷酸引物的3’端部分为第一寡核苷酸引物与模板核酸退火的部分，并且添加到第一寡核苷酸引物的5’末端上的标识序列为4个碱基以上且20个碱基以下的序列，其中所述反应溶液中还含有二价阳离子，并且所述的至少一种DNA聚合酶为具有链置换能力的DNA聚合酶。