普美拉肽的制备方法

摘要

本发明公开了一种用于治疗性功能障碍的普美拉肽(pt141)采用Fmoc(芴甲氧羰基)保护的固相合成法的制备方法，包含：1.固相合成带保护集的普美拉肽；2.树脂上环化普美拉肽；3.从树脂上切割普美拉肽；4.HPLC纯化普美拉肽；5.转为醋酸普美拉肽。

主权项

一种普美拉肽的制备方法，反应步骤如下：1)称取10克分子量为0.73毫摩尔/克的Fmoc‑Lys(Mmt)Wang Resin加入200毫升的反应瓶中，并加入100毫升DMF溶胀树脂30分钟，抽干，再用DMF振荡洗涤树脂三次，每次50毫升，2分钟一次，抽于；加50毫升脱保护试剂20％哌啶/DMF振荡反应30分钟，抽出脱保护液，用DMF洗涤树脂三次，抽干，取少许树脂做茚三酮检测，呈阳性；依次向反应瓶中加入44毫升DMF、11.52克Fmoc‑Lys(Boc)、8.30克HBTU、2.40毫升NMM，振荡反应30分钟，取少许树脂做茚三酮检测，呈阴性；抽出反应液，再用DMF振荡洗涤树脂三次，每次大约一分钟，抽干；加50毫升脱保护液于树脂中，振荡反应30分钟，取少许树脂做茚三酮检测，呈阳性；抽出脱保护液，用DMF振荡洗涤树脂三次，抽干；2)依次向反应瓶中加入44毫升DMF、14.61克Fmoc‑Arg(pbf)、8.30克HBTU、2.40毫升NMM，振荡反应30分钟，取少许树脂做茚三酮检测，呈阴性；抽出反应液，再用DMF振荡洗涤树脂三次，抽干；量取50毫升脱保护液加入反应瓶中，振荡反应30分钟，取少许树脂做茚三酮检测，呈阳性；抽出脱保护液，再用DMF振荡洗涤树脂三次，抽干；3)依次向反应瓶中加入44毫升DMF、8.82Fmoc‑D‑Phe、8.30克HBTU、2.40毫升NMM，振荡反应30分钟，取少许树脂做茚三酮检测，呈阴性；抽出反应液，再用DMF振荡洗涤树脂三次，抽干；量取脱保护液50毫升加入反应瓶中，振荡反应30分钟，取少许树脂做茚三酮检测，呈阳性；抽出脱保护液，再用DMF振荡洗涤树脂三次，抽干；4)依次向反应瓶中加入44毫升DMF、14.12克Fmoc‑His(Trt)、8.30克HBTU、2.40毫升NMM，振荡反应30分钟，取少许树脂做茚三酮检测，呈阴性；抽出反应液，再用DMF振荡洗涤树脂三次，抽干；量取脱保护液50毫升加入反应瓶中，振荡反应30分钟，取少许树脂做茚三酮检测，呈阳性；抽出脱保护液，再用DMF振荡洗涤树脂三次，抽干；5)依次向反应瓶中加入44毫升DMF、9.37克Fmoc‑Asp(O‑2‑Phipr)、8.30克HBTU、2.40毫升NMM，振荡反应30分钟，取少许树脂做茚三酮检测，呈阴性；抽出反应液，再用DMF振荡洗涤树脂三次，抽干；量取脱保护液50毫升加入反应瓶中，振荡反应30分钟，取少许树脂做茚三酮检测，呈阳性；抽出脱保护液，再用DMF振荡洗涤树脂三次，抽干；6)依次向反应瓶中加入44毫升DMF、8.05克Fmoc‑Nle、8.30克HBTU、2.40毫升NMM，振荡反应30分钟，取少许树脂做茚三酮检测，呈阴性；抽出反应液，再用DMF振荡洗涤树脂三次，抽干；量取脱保护液50毫升加入反应瓶中，振荡反应30分钟，取少许树脂做茚三酮检测，呈阳性；抽出脱保护液，再用DMF振荡洗涤树脂三次，抽干；7)向反应瓶中加入50毫升50％醋酐/DMF，振荡反应30分钟，取少许树脂做茚三酮检测，呈阴性；抽出反应液，再用DMF振荡洗涤树脂三次，抽干；干燥；8)将已干燥好的肽树脂加入反应瓶中，再将已配制好的400毫升1％TFA IN DCM反应液加入反应瓶中，25度下反应1小时，反应结束后，用DCM洗涤树脂三次，DMF振荡洗涤树脂4次，再用5％NMM/DMF洗涤树脂3次，抽干，茚三酮检测呈阳性；依次向反应瓶中加50毫升DMF、3.8克HBTU、1.1毫升NMM，振荡反应1小时，取少许树脂做茚三酮检测，呈阴性，抽出反应液，再用DMF振荡洗涤树脂3次，甲醇洗涤树脂3次，真空干燥8小时；9)将已配置好的裂解液加入盛有普美拉肽树脂的反应瓶中，振荡反应2.5小时，抽滤出裂解液，再用100毫升三氟乙酸分三次洗涤树脂，收集裂解液和洗涤液，减压浓缩至原体积的1/3，缓解加入已冷却好的乙醚中，搅拌，有白色沉淀析出，在‑20摄氏度的冰柜中放置2小时，抽滤，滤饼用乙醚泡洗3次，抽干，真空干燥，得粗肽6.4克，收率为80.8％。