利用维管特异启动子控制人工合成的抗菌肽基因的植物表达载体及其培育抗黄萎病棉花的方法

摘要

本发明提供了一种利用维管特异启动子控制人工合成的抗菌肽基因的植物表达载体及其培育抗黄萎病棉花的方法。该方法是将AAP2维管特异启动子控制下的人工合成的抗菌肽基因spCEMA整合到棉花基因组，实现spCEMA基因在棉花维管组织内特异表达，显著提高棉花对黄萎病的抗病性。应用这一方法获得的转基因棉花纯合株系病圃内接种黄萎病不同的致病菌，病情指数小于15，可较非转基因对照降低85%以上。

主权项

利用维管特异启动子控制人工合成的抗菌肽基因的植物表达载体，其特征在于，为含有维管特异启动子AAP2控制人工合成抗菌肽基因spCEMA的植物表达载体；提取拟南芥总DNA后进行PCR扩增，再与pUC‑T载体连接，转化大肠杆菌DH5α感受态细胞，筛选阳性克隆得到拟南芥AAP2基因的启动子，然后以其取代植物表达载体p5‑spCEMA上的组成型启动子CaMV35S，构建一个植物表达体，命名为p5‑AAP2‑spCEMA；其中，以拟南芥基因组DNA为模板，序列1和序列2为引物扩增AAP2基因的启动子序列，启动子AAP2片段长2248bp，如序列7所示。