一种产牛磺酸菌株的筛选方法及用该菌株发酵法生产牛磺酸

摘要

本发明阐述了一种产牛磺酸菌株的筛选方法及用该菌株发酵法生产牛磺酸，属于生物工程技术领域。本发明菌株首先将土壤经过沸水浴后稀释涂布，染色镜检获得有芽孢菌株，然后对筛选出的菌株采用一级发酵逐一摇瓶培养，发酵液中加入牛磺酸标准品作为内标，采用高效液相色谱法进行定性分析筛选，并对筛选菌株进行形态学、生理生化及分子生物学鉴定，最终获得一株高产牛磺酸的枯草芽孢杆菌。本发明同时公开一种采用该菌株生产牛磺酸的方法，采用本方法发酵72h牛磺酸产量为1g/L。

主权项

一种产牛磺酸枯草芽孢杆菌的筛选方法，其特征为：1)枯草芽孢杆菌的初步分离纯化称取约0.2g土壤于20ml 0.85％无菌生理盐水中，将菌悬液在沸水中振荡加热10min后，迅速冷却至室温，稀释菌悬液涂布于营养肉汤平板上，30℃倒置培养24h，挑取不同菌落形态的单菌落进行结晶紫染色，显微镜下观察芽孢，将有芽孢菌株作为进一步筛选的枯草芽孢杆菌疑似菌株，编号保存；2)产牛磺酸枯草芽孢杆菌的筛选将上述分离纯化得到的菌种接种于种子培养基中，然后转接到发酵培养基中，培养72h后离心收集发酵液，发酵液经过预处理后采用内标法经高效液相色谱进行定性分析，使得牛磺酸标准品峰高增高的菌株即为产牛磺酸的枯草芽孢杆菌。