一种提高八氢番茄红素脱氢酶体外反应速率的方法

摘要

本发明涉及一种提高水-有机两相酶促反应速率的方法，尤其涉及一种提高八氢番茄红素脱氢酶体外反应速率的方法，属于生物工程技术领域。它包括如下步骤：(1)取破碎粗酶液，加入八氢番茄红素丙酮溶液、葡萄糖、葡萄糖氧化酶和过氧化氢酶，超声波混匀，28℃～30℃避光密闭振荡反应，然后加甲醇，55℃～60℃温浴15～20分钟，加入沸程30℃～60℃的石油醚振荡萃取反应产物，收集上层石油醚层，经真空旋转蒸发，得产物。本发明利用超声波的均质、分散和乳化等力学效应，对八氢番茄红素脱氢酶体外反应体系进行优化，增大了底物和酶接触的机会，显著提高了酶促反应速率，缩短了反应时间，减少产物的氧化损失，提高了数据的准确度。

主权项

一种提高番茄红素脱氢酶体外反应速率的方法，包括如下步骤：（1）取400μL破碎粗酶液，加入八氢番茄红素丙酮溶液、葡萄糖、葡萄糖氧化酶和过氧化氢酶，使终浓度分别为10μmol/L、2mmol/L、20U/mL和20000U/ml，反应体系用缓冲液定容至500μL，得反应液；（2）将步骤（1）制得的反应液，在22kHz、100W超声波混匀30秒， 30℃避光密闭振荡反应1小时，得反应后溶液；（3）向步骤（2）制得的反应后溶液中加2.5～3 mL甲醇，55℃～60℃温浴15～20分钟，终止反应，加入沸程30℃～60℃的石油醚300μL，振荡萃取反应产物，收集上层石油醚层，经真空旋转蒸发，得产物。