利用降低亲和力酶互补报告分子系统检测分子间相互作用

摘要

本发明提供了用于检测分子间相互作用的方法和组合物。本发明的方面包括使用降低亲和力酶互补报告分子系统。还提供的是用于实施所述方法的实施方式的系统和试剂盒。

主权项

一种测定第一和第二蛋白质是否相互作用的方法，所述方法包括：(a)提供细胞，其包含：(i)所述第一蛋白质和第一β‑半乳糖苷酶片段的第一融合蛋白，其中所述第一β‑半乳糖苷酶片段是长度60个氨基酸或更少的变异的最小N‑末端β‑半乳糖苷酶肽；和(ii)所述第二蛋白质和第二β‑半乳糖苷酶片段的第二融合蛋白；其中所述第一和第二β‑半乳糖苷酶片段之间具有亲和力，其在不存在所述第一和第二蛋白质之间的相互作用的情况下提供已知水平的β‑半乳糖苷酶活性，所述活性低于在存在所述第一和第二蛋白质之间的相互作用的情况下所观察到的活性，其中所述变异的最小N‑末端β‑半乳糖苷酶肽包含在SEQ ID NO：1中编号的氨基酸残基29到41之间的点突变，插入或缺失；和(b)评估所述细胞的β‑半乳糖苷酶活性来确定所述第一和第二蛋白质是否相互作用。