碘量法检测奶及奶制品中的β-内酰胺酶

摘要

本发明涉及一种奶及奶制品中β-内酰胺酶的快速检测方法，基本原理是β-内酰胺酶能够分解青霉素，生成的产物青霉噻唑酸与淀粉竞争游离碘，破坏碘与淀粉形成的复合物，使溶液由蓝色变为无色。向经过处理的奶及奶制品中加入青霉素和碘-淀粉显色剂后，与空白进行对照，根据溶液颜色的变化对β-内酰胺酶进行定性、半定量分析。本发明从青霉素的浓度、缓冲液的pH值、显色剂的浓度和比例、实际样品净化条件、反应温度和离心条件等方面着手，建立起一套全新的检测奶及奶制品中β-内酰胺酶的方法。该方法的定性及半定量的最低检出限为1.5U/mL。将该技术进行推广，研发成检测试剂盒，可以实现实时、在线的检测，从而带来很好的社会和经济效益。

主权项

一种奶及奶制品中的β‑内酰胺酶的检测方法，包括步骤如下：(1)样品前处理向待测奶制品中加入磷酸盐缓冲溶液及氨苄青霉素溶液，混合均匀后置于恒温箱中，加入醋酸盐缓冲溶液，振荡，取上清液，离心，除蛋白、脂肪后备用；(2)碘‑淀粉显色剂制备：将浓度为0.1mol/L的碘标准溶液稀释30倍后与1％的淀粉溶液以1∶2的比例混合制成显色剂；(3)显色反应向步骤1所得溶液中加入显色剂，记录显色剂的褪色时间，同时用水做空白，与空白进行对比，若在空白之前褪色，说明样品中含有β‑内酰胺酶，从而实现定性和半定量分析。