用蜂王浆制备功能蛋白RJCPs的方法与应用

摘要

本发明公开了一种用蜂王浆制备功能蛋白RJCPs的方法，该功能蛋白RJCPs通过新鲜蜂王浆或新鲜蜂王浆冻干粉经PBS缓冲液溶解、离心分离、透析除盐、冻干而成；本发明所制备的蜂王浆功能蛋白RJCPs是一种细胞生长因子，可替代牛血清应用于昆虫、动物、人体细胞的传代和原代体外无血清培养生存生长培养。

主权项

一种用蜂王浆制备功能蛋白RJCPs的方法，其特征在于，该方法包括以下步骤：(1)称取冷冻保存的王浆冻干粉5g，溶于15mL1×磷酸缓冲液PBS中，4℃下抽提24h；所述1×磷酸缓冲液PBS的配制方法如下：NaCl 8g、KCl 0.2g、KH2PO4 0.24g、Na2HPO4·12H2O 3.63g，溶解800mL蒸馏水中，用HCl调节溶液的pH值至7.4，加水定容至1L，高压蒸汽灭菌20min，室温保存；(2)将步骤(1)抽提后的王浆溶液置离心管，用冷冻离心机在12000rpm转速下离心30min，取上清，得可溶性王浆蛋白MRJPs；(3)将可溶性王浆蛋白MRJPs置截流分子量为14kDa的透析袋中，将透析袋置去离子水中，在4℃下透析24h，期间每隔6～8h换水一次，去除盐离子；(4)将透析过的可溶性王浆蛋白MRJPs置真空冷冻干燥机冻干，‑20℃保存，得到蜂王浆功能蛋白RJCPs。