利用酯酶同工酶电泳法对两系杂交水稻种子进行纯度检验的方法

摘要

本发明公开了一种利用酯酶同工酶电泳法对两系杂交水稻种子进行纯度检验的方法，对以广占63S为母本的两系杂交水稻品种丰两优一号、丰两优三号、丰两优香一号的父母本和杂交一代的酯酶同工酶进行电泳分离，找出杂交一代与父母本差异的特征谱带，用于对杂交一代种子受检样品的纯度检验。通过对丰两优一号、丰两优三号、丰两优香一号样品进行检验，其检验的纯度经与田间种植鉴定的纯度对照比较，二者的结果高度一致。适用于对以广占63S及衍生系为母本的两系杂交水稻品种及其亲本真实性和种子纯度的检验。

主权项

一种利用酯酶同工酶电泳法对两系杂交水稻种子进行纯度检验的方法，包括对以广占63S为母本的两系杂交水稻品种丰两优一号、丰两优三号、丰两优香一号的父母本和杂交一代的酯酶同工酶进行电泳分离，找出杂交一代与父母本差异的特征谱带，用于对杂交一代种子受检样品的纯度检验；其具体步骤是：1)样品酯酶同工酶的提取：将种子浸种24小时后，取发芽3‑4天后的幼芽放入1.5ml离心管中，加入100μl含40％蔗糖和pH8.0的0.4mol/L三羟基氨基甲烷‑盐酸的提取液，冰浴磨碎后，用冷冻离心机分离，提取酯酶同工酶制备液；2)置板、灌胶：将垂直板电泳槽玻璃板两侧用凡士林封住后，用琼脂糖封住底部；玻璃板之间按20ml量倒入分离胶；待分离胶凝固后，再按8ml量倒入浓缩胶，插入样品梳；3)点样：浓缩胶凝固后，拔去样品梳，每孔点入20μl酯酶同工酶制备液；4)电泳：点样结束后，电泳仪在稳压300v的条件下，以20mA电流电泳，待指示剂线过浓缩胶后，调至30mA，电泳时间为2.5小时；5)染色：指示剂线离胶板底部约1cm时结束电泳，取下胶片，先在由A预处理液和B预处理液组成的混合液中预处理20分钟，再置于由A预处理液、B预处理液、固蓝B盐和丙酮组成的混合液中进行染色20分钟，水洗后，即获样品电泳谱带；所述A预处理液为0.15gα‑萘酯+30ml丙酮+120mlPBS；所述B预处理液为0.15gβ‑萘酯+30ml丙酮+120mlPBS；6)受检种子纯度检验：用上述方法分别获取标准电泳谱带和受检样品电泳谱带，将受检样品的电泳谱带与标准电泳谱带进行对照比较，获得受检样品的种子纯度；其特征在于：所述分离胶由胶贮液、分离胶缓冲液、水、过硫酸铵和四甲基乙二胺按1∶1∶2∶40∶4构成；所述浓缩胶由胶贮液、浓缩胶缓冲液、蔗糖、水、过硫酸铵和四甲基乙二胺按1∶2.5∶1.5∶125∶62.5构成；所述分离胶和浓缩胶中的胶贮液为29.1％丙烯酰胺+0.9％甲叉双丙烯酰胺。