一种木霉滴丸剂及其制备方法和应用

摘要

本发明属于微生物活性农药技术领域。本发明木霉滴丸剂包含木霉孢子悬浮液和滴丸基质，其中，木霉T1菌株孢子悬浮液是由棘孢木霉菌株T1(Trichoderma asperellum T1，保藏于微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏号为CGMCC NO：3531，保藏日期为2009年12月17日)的孢子粉配制，其rDNA ITS区片段序列如SEQ ID NO：1所示；本发明还含有浓度为0.5～1.5g/L孢子悬浮液的防腐剂。滴丸基质为聚乙二醇1000、聚乙二醇2000和聚乙二醇4000中的一种或二种或三种的混合物。本发明木霉滴丸剂具备含药量大、生物活性高、成型效果好、能在最短时间内溶散、便于贮藏、运输和使用。

主权项

一种木霉滴丸剂的制备方法，其特征在于包括如下步骤：（1）将棘孢木霉菌株T1植于PDA培养基上使其复苏，再采用酵母膏蔗糖培养基进行菌种继代培养，待长出直径为5~7mm的深绿色菌落后，将菌落接种，在酵母膏蔗糖培养基和麸皮木屑培养物中进行扩大培养，直至长出白色菌丝或绿色孢子；（2）将白色菌丝或绿色孢子制成孢子悬浮液，过滤沉淀为浓缩孢子液；（3）向浓缩孢子悬浮液中添加防腐剂，溶解搅拌均匀，即得木霉滴丸剂原药；（4）将滴丸基质预热至熔化状态；注入冷凝剂至滴丸机中并设置温度进行预冷；（5）将木霉滴丸原药加入预热的滴丸基质中，用滴丸机进行滴丸，即得木霉滴丸剂；所述木霉孢子悬浮液是由棘孢木霉菌株T1（Trichoderma asperellum T1，保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏号为CGMCC NO:3531，保藏日期为2009年12月17日）的孢子粉制备，其rDNA ITS区片段序列如SEQ ID NO:1所示。2. 根据权利要求1所述一种木霉滴丸剂的制备方法，其特征在于：步骤（1）中所述酵母膏蔗糖培养基为高温灭菌过的培养基，灭菌温度为121℃，灭菌时间为30min，酵母膏蔗糖培养基的配方为：酵母膏15g，蔗糖20g，KH2PO41g，麦芽膏15g，硫酸钠2g，氯化钾0.5g，维生素B 0.5mg，维生素C 0.5mg，七水合硫酸镁0.05g，硫酸铁0.01g，琼脂20g，水1L。3. 根据权利要求2所述一种木霉滴丸剂的制备方法，其特征在于步骤（1）中所述菌种继代培养的温度为30℃，湿度为70~85%，培养时间为48~72h；所述扩大培养的温度为30℃，湿度为70~85%，培养时间为5~7d。4. 根据权利要求3所述一种木霉滴丸剂的制备方法，其特征在于：所述麸皮木屑培养物是麸皮、木屑、蔗糖、维生素B和水的混合物，其中，麸皮、木屑、蔗糖三者的质量比为2：1：0.02；维生素B用量为每千克麸皮木屑培养物中加入0.5mg，每瓶装瓶量为15g；每瓶加水量5ml；防腐剂为水杨酸、山梨酸钾和苯甲酸钠中的一种或多种的混合，用量为0.5~1.5g/L孢子悬浮液；用于酵母膏蔗糖培养基和麸皮木屑培养物灭菌的温度为121℃，灭菌时间为30min。5. 根据权利要求4所述一种木霉滴丸剂的制备方法，其特征在于：步骤（4）所述木霉滴丸的基质为聚乙二醇1000、聚乙二醇2000和聚乙二醇4000中的一种或多种的混合；原药与熔化的基质按照体积质量比1：10～3：10混合；冷凝剂可选择液体石蜡或二甲基硅油或植物油；冷凝温度为0℃；步骤（5）中药液的油浴温度为55℃，搅拌速度为20~300转/分钟，滴距为24cm。