主权项 |
一种端粒酶活性检测试剂盒,其特征在于,包括:端粒酶底物,能够被端粒酶识别并进行延长反应;端粒酶逆转录缓冲液,用于延长端粒酶底物的反应;DNA分子机器工具,包括具有链置换扩增活性的DNA聚合酶和核酸切口酶;触发DNA分子机器工具的探针,包括3WJ模板、3WJ引物、primer 1和primer 2;端粒酶底物:3WJ模板:3WJ引物的摩尔比为1:0.5~1.5:0.5~1.5;3WJ模板由3′端开始包括三部分:第一部分与端粒酶底物的5′端12~16bp的序列相互补,第二部分与3WJ引物3′端5~8bp的碱基互补,第三部分是用于一级扩增的模板,包含一个核酸切口酶的识别位点;3WJ引物由3′端开始包括三部分,第一部分与3WJ模板的第二部分相互补的序列,第二部分与端粒酶底物3′端2~6bp的序列相互补,第三部分与端粒酶底物的延长部分的序列相互补;端粒酶底物:primer 1:primer 2的摩尔比为1:5~10:5~10;primer 1包括两部分,3′端第一部分与primer 2的3'端互补,其长度为5~8个bp;第二部分是与一级扩增产物相互补的序列;primer 2包括两部分,3′端第一部分与primer 1的第一部分互补;第二部分是用于二级扩增的模板,其长度为15~21bp;分子信标探针包括一个茎环结构,其两端分别标记有荧光基团和猝灭基团,其环状部分序列与二级扩增产物的序列相互补,分子信标探针的摩尔浓度为primer 2的3~6倍;DNA分子机器扩增反应缓冲液:10mM Tris‑HCl,50mM NaCl,10mMMgCl2和1mM DDT,pH=7.9。 |