METHOD FOR PRODUCING A NEURAL MATRIX

摘要

Die Erfindung betrifft ein Verfahren zur Herstellung einer neuronalen Matrix unter Anwendung einer Kollagen-Chitosan-Unterlage und Nährböden zum Züchten von menschlichen embryonalen Stammzellen. Damit die Züchtungsqualität und -stabilität erhöht, die proliferative Aktivität der pluripotenten Stammzellen einschließlich ihrer Ausdifferenzierung in neuronale Zellen erhöht, die Immunogenität der Mikroumgebung der Zellen vermieden und die Erzeugung einer für die Transplantation geeigneten Matrix sichergestellt wird, sieht die Erfindung vor, dass die Biomasse der menschlichen embryonalen Stammzellen einer feederfreien hESKM-05-Linie zuerst in mit 0,1%iger Gelatinelösung beschichteten Flaschen angelagert wird, wobei ein koDMEM-Hauptboden verwendet und täglich gewechselt wird, dass der Hauptboden 10 % Serumersatzmittel SR, 100 µg/ml Kanamycinsulfat, 1 mM L-Glutamin-Lösung, 4 ng/ml eines Haupt-Wachstumfaktors von Fibroblasten (bFGF) und 1 mM einer essentiellen Aminosäure-Lösung enthält und dass die Biomasse danach mit Hilfe einer 0,5%igen Kollagenase-Lösung in Flaschen übertragen wird, welche eine vorbereitete Kollagen-Chitosan-Matrix in einem konditionierten Boden enthält, der von einer embryonalen neuronalen Zellkultur der Mäuse produziert wird oder aus einem Komplett-Nährboden unter Zugabe eines neuronalen N2-Faktors besteht, wobei der Boden alle drei Tage gewechselt wird.