基于细胞电子传感器的烟气冷凝物细胞毒性测定方法

摘要

一种基于细胞电子传感器的烟气冷凝物细胞毒性测定方法，其特征在于：包括以下工艺步骤：1)配制实验试剂，2)制备烟气冷凝物，3)细胞接种培养，4)烟气冷凝物染毒，5)结果与分析。本发明是利用细胞传感器芯片实时监控细胞生长情况和卷烟主流烟气冷凝物染毒后不同冷凝物浓度对细胞生长的影响。建立了实时、无标记、高通量的卷烟主流烟气冷凝物的细胞毒性测定新方法。本发明与中性红吸收方法相比减少了中性红染色和繁复的清洗步骤，使得试验过程更加简便；同时根据细胞接种后的实时细胞生长曲线对细胞进行质量控制，优化染毒时间和染毒浓度，实时监控染毒后不同烟气冷凝物浓度对细胞生长曲线的影响，使实验结果更加准确可靠。

主权项

一种基于细胞电子传感器的烟气冷凝物细胞毒性测定方法，其特征在于：包括以下工艺步骤：（1）、 烟气冷凝物的制备：制备最终浓度为100 mg TPM/mL的标准储备液；（2）、基于细胞电子传感器的烟气冷凝物细胞毒性测定：a、 溶液背景扣除：首先在底部整合了细胞电子传感芯片的细胞培养板的每个孔中加入50µL培养基，放置于细胞培养箱中的芯片读取装置上，系统自动扣除由培养基引起的阻抗信号变化背景，从而实现对细胞引起信号变化的监控；b、              细胞接种：取出底部整合了细胞电子传感芯片的细胞培养板，每孔加入100µL含有5000个CHO‑K1细胞的培养基溶液，置于芯片读取装置上，通过数据分析系统显示的细胞因子值实时监测细胞的贴附与增殖状态；c、 染毒时间的确定：当细胞处于指数增长期时进行烟气冷凝物染毒；d、              DMSO溶剂浓度的优化：DMSO溶剂浓度低于0.5%；e、 烟气冷凝物染毒：将浓度为100mg TPM/mL的烟气冷凝物储备液用培养基稀释为一系列浓度梯度，每孔加入50µL含烟气冷凝物的培养基，使得最终染毒浓度为25µg/mL、50µg/mL、100µg/mL、150µg/mL、200µg/mL、250µg/mL、300µg/mL，每个浓度平行6孔测定，同时设置0.3%的DMSO溶剂对照组和加入50µL培养基的正常对照组；染毒后将前述的底部整合了细胞电子传感芯片的细胞培养板置于芯片读取器上对细胞染毒后24h内的状态变化继续进行实时监控；f、IC50值的求出：通过不同浓度烟气冷凝物作用下的细胞生长曲线，细胞电子传感器的数据分析系统将自动绘制染毒浓度对数‑响应值曲线，求出染毒24小时时该烟气冷凝物的IC50值。