一种人工湿地污水处理系统微生物活性检测方法

摘要

本发明提供了一种人工湿地污水处理系统微生物活性检测方法，包括人工湿地微生物取样、培养、萃取、测定和计算的基本步骤，本发明采用碘硝基四氮唑作为电子受体，基于INT的强电子亲和性取消除氧步骤，培养时间为2h，以乙醇为萃取剂常温提取微生物细胞内的INTF。本发明的积极效果体现在：INT的电子亲和力大，与氧竞争电子能力强，并可用于检测人工湿地系统中好氧、厌氧及反硝化脱氮微生物的电子传递体系活性，在常温条件下完成萃取过程，避免了高温产生的萃取不完全、萃取剂蒸发等问题；将微生物干重直接测定法与微生物电子传递活性检测过程相结合，避免了因基质和植物根际生物量不同和取样不均而导致的误差。

主权项

一种人工湿地污水处理系统微生物活性检测方法，其特征在于，依次包括如下步骤：(1)从人工湿地污水处理系统中取出附着微生物的植物根须，先将其超声振荡10min，然后收集脱落的生物膜，用无菌水稀释备用；(2)将生物活性测试管用无菌水清洗干净，在105±1℃下烘干至恒重，记录质量W1；(3)向10mL的测试管中依次加入1mL的微生物悬浊液、1.5mL的pH为8.4的Tris‑HCl缓冲溶液和1mL重量浓度为2mg/mL的碘硝基四氮唑溶液；(4)将制备完成的样品放在37±1℃的水浴振荡器内，暗处振荡培养0.5h；(5)培养过程结束后，向测试管中加1mL体积浓度为37％的甲醛溶液，终止酶反应，然后将样品在4000r/min下离心5min，弃去上清液；(6)向样品中加入5mL乙醇，混合搅拌均匀，在37±1℃下暗处振荡萃取10min；(7)将萃取完毕的样品在4000r/min下离心5min，然后在分光光度计的485nm处，以加入0.1mL间甲酚的样品为空白对照，测定待测样品的INTF萃取液吸光度；(8)将分离的样品在105±1℃下烘干至恒重，记录质量W2；(9)采用下式计算： INT - ETSA = OD 452 × V K × t × W 计算结果如下：OD485为波长485nm处的上清液吸光度＝1.111；V为萃取剂体积＝5mL；K为标准曲线斜率＝47.492mL/mg；t为培养时间0.5h；W＝(W2‑W1)为微生物样品质量＝0.0056g；W2＝11.2386g；W1＝11.2330g；INT‑ETSA为微生物电子传递体系活性＝41.774mg/(g·h)；标准曲线的制作：1)准确称取0.050gINTF定容于50mL茶色容量瓶中，此溶液即为1mg/mL的INTF标准溶液；2)分别吸取1mg INTF/mL标准溶液0.1，0.2，0.3，0.4，0.5，0.6，0.7，0.8，0.9，1，2mL加于50mL茶色容量瓶中，再用乙醇分别稀释至50mL，摇匀，于是得到每毫升含有0.002，0.004，0.006，0.008，0.010，0.012，0.014，0.016，0.018，0.020，0.040mgINTF的系列溶液；3)在721分光光度计的485nm处，用光程1cm的比色皿，以乙醇作为空白溶液，测定上述11种浓度溶液的吸光度；4)将上述11种浓度溶液的浓度与相应的吸光度作曲线，绘制出INTF在乙醇溶液中的标准曲线。