一种金针菇、灵芝混菌发酵的方法

摘要

本发明涉及一种金针菇、灵芝混菌发酵的方法，方法步骤：（1）分别制备金针菇、灵芝的发酵种子液；（2）制备混菌发酵培养基，该培养基由蔗糖、淀粉、马铃薯、玉米、黄豆组成；（3）将步骤（1）中制得的金针菇、灵芝发酵种子液共同接种于混菌发酵培养基中进行混菌深层培养，进而获得多糖、三萜类化合物等活性产物。优点：（1）实现了金针菇、灵芝菌丝体的混菌发酵培养；（2）培养基配方天然，使用方便：在混菌发酵培养基中，使用的均为天然粮食作物，无化学试剂，配制方便、简单，而且通常在发酵过程中，不必对pH值进行调节；（3）通过金针菇、灵芝混菌发酵，与金针菇、灵芝单菌发酵相比，胞外多糖、三萜类化合物产量均得以8%~35%的提高。

主权项

一种金针菇、灵芝混菌发酵的方法，其特征是：该混菌发酵方法为：混菌发酵培养基由双糖、多糖、淀粉类粮食、蛋白质类粮食组成，所述的混菌发酵培养基包括：10~20g/L淀粉、15~25g/L马铃薯、10~20g/L蔗糖、10~30g/L玉米、1~10g/L黄豆；采用液体深层发酵技术，混菌培养金针菇和灵芝；以金针菇和灵芝为菌种，经马铃薯葡萄糖琼脂培养基活化、液体发酵培养制备单菌发酵种子液，混合接种金针菇、灵芝于混菌发酵培养基，接种比例1:1~3:1，温度22~26℃，pH 4.5~5.5，培养时间是120~240h，混菌发酵后的菌丝和发酵液可用于发酵产物：生物量、多糖及三萜类化合物的提取与测定；具体步骤如下：（1）配制马铃薯葡萄糖琼脂斜面培养基：按照GB4789.15—2010《食品卫生微生物学检验 霉菌和酵母计数》配制，用于菌种的复苏及保存；（2）菌种活化：取金针菇No. 5.65菌株和灵芝No. 5.786菌株分别接种于马铃薯葡萄糖琼脂斜面培养基上活化1~2次；（3）分别制备单菌发酵种子液：取金针菇、灵芝活化后的菌块分别接种于液体培养基中，22~26℃发酵培养168~288h；（4）配制混菌发酵培养基：马铃薯去皮后切成约1cm3小块，玉米、黄豆粉碎至颗粒大小为100μm，培养基组成为10~20g/L淀粉、15~25g/L马铃薯、10~20g/L蔗糖、10~30g/L玉米、1~10g/L黄豆，加水配制；先将马铃薯、玉米、黄豆加水煮25min，再加入溶解好的淀粉和蔗糖，加水定容后灭菌；（5）制备混菌发酵种子液：取金针菇、灵芝单菌发酵种子液，接种于混菌发酵培养基中，共酵培养液酸碱度pH 4.5~5.5，接种量配比为1:1~3:1，共计5%，22~26℃发酵培养144~240h；（6）分离生物量：发酵液过滤收集菌丝，60℃烘干至质量恒定并称质量；（7）胞外粗多糖提取与测定：发酵液过滤后离心取上清液，80~90 ℃水浴浓缩成原体积的0.2~0.25倍，加入4~5倍体积95%乙醇，4℃静置，浓缩液离心，用无水乙醇洗涤沉淀两次，烘干至恒重，得胞外粗多糖；（8）胞内三萜类化合物的提取：取1 g菌丝加50 mL甲醇静置过夜后过滤，蒸干后加4 mL 95%乙醇溶解；（9）胞外三萜类化合物的提取：取发酵液15mL，用3倍体积的水饱和正丁醇萃取3次，合并正丁醇提取液，减压蒸干，加4mL 95%乙醇溶解。