尿液间充质干细胞的提取及扩增培养方法和应用

摘要

本发明公开了一种尿液间充质干细胞的提取及扩增培养方法和应用。通过从人的尿液中分离间充质干细胞，并在含有细胞生长因子的培养基中培养和扩增尿液间充质干细胞。用本发明提取及扩增培养的尿液间充质干细胞可修复多种组织器官损伤。本发明的优点是干细胞的来源广泛，简单易行，易于推广和实施。本发明尿液间充质干细胞的提取方法具有无创伤及来源广的特点，并且能诱导分化成多种细胞，在组织工程和再生医学中具有广泛的应用前景。

主权项

一种尿液间充质干细胞的提取及扩增培养方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)尿液的获取：在无菌条件下，取健康人的清洁中段尿液200‑250ml，加入5ml抗生素，立即进行下一步骤；(2)初步离心：将清洁尿液分装至50ml离心管中，400g离心10min，弃上清；(3)洗涤：用PBS洗涤沉淀后以400g离心10min，并重复该步骤一次；(4)细胞计数、活性检测和培养；取100μL细胞重悬液并应用台盼蓝检测细胞活性并计数，调整细胞密度，接种至含有无血清培养基的六孔板中，置于细胞培养箱中培养；(5)细胞扩增：在培养3‑7天后在相差显微镜下观察，如观察到细菌污染则弃去，无污染则继续培养，可发现单个细胞贴壁生成，标记单个细胞在六孔板中的位置，再连续观察7‑10天后，吸取原培养液，PBS洗涤尿液中的残渣，继续培养14‑21天后，可以陆续观察到克隆逐渐向四周延伸，克隆逐渐变大，待细胞达到80％左右的融合度后，胰蛋白酶消化离心，重悬后得到间充质干细胞，传至另一六孔板中继续培养；(6)细胞诱导分化：分别取5‑10代的尿液间充质干细胞加入不同的细胞诱导分化培养基，诱导其向骨细胞、软骨细胞、脂肪细胞、神经细胞或血管内皮细胞分化。