用环介导等温扩增方法检测支气管败血波氏杆菌的试剂盒及其方法

摘要

本发明与动物疫病分子生物学检测领域有关，具体涉及一种用环介导等温扩增(LAMP)技术快速检测支气管败血波氏杆菌的检测试剂盒及其方法。本发明根据NCBI中Genbank数据库中发布的支气管败血波氏杆菌序列，经过序列比对，采用LAMP引物设计软件设计引物，运用环介导等温扩增技术进行支气管败血波氏杆菌的检测，具有快速、灵敏度高、特异性强、成本低等特点，可广泛应用于临床的检测。

主权项

一种用环介导等温扩增方法检测支气管败血波氏杆菌的试剂盒，其特征在于，该试剂盒包括：环介导等温扩增反应液，23μL/份，其组成如下：1μL浓度为8U的BstDNA聚合酶，2.5μL的聚合酶缓冲液，浓度为5μmol/L的上游内引物FIP和下游内引物BIP各1μL，浓度为25μmol/L的上游外引物F3和下游外引物B3各1μL，2μL浓度为100mM的MgSO4，5μL浓度为10mM的dNTP，5μL浓度为5M的甜菜碱，3.5μL的无菌水；其中聚合酶缓冲液含有200mM Tris‑HCl(pH8.8)，100mM KCl，100mM(NH4)2SO4，20mM的MgSO4，1％Triton X‑100；所述的引物序列为：上游外引物F3：CCTTTGCCGCCAGATTCC下游外引物B3：GCTCCCAAGAGAGAAAGGC上游内引物FIP：TGGATTACGGCAGGTTTGCGA‑CCCGCACATTTCCGAACT下游内引物BIP：GGCAACAAAGGAAATCGCGGC‑TCTTCAAACCGGGCAGCT。