基于核酸适配体检测人中性粒细胞弹性蛋白酶的方法

摘要

本发明提供了一种基于核酸适配体检测人中性粒细胞弹性蛋白酶的方法及其试剂盒，本发明将核酸适配体修饰到酶标板上作为识别试剂，选择性捕获中性粒细胞弹性蛋白酶分子，再通过中性粒细胞弹性蛋白酶催化底物反应生成产物，通过测定吸光度或荧光强度的变化，实现对人中性粒细胞弹性蛋白酶的高灵敏高特异性检测。本发明具有操作简单、快速、易于高通量检测、特异性好、灵敏度高的优点。

主权项

一种基于核酸适配体检测人中性粒细胞弹性蛋白酶的方法，其特征在于，包括如下步骤：(1)制备核酸适配体修饰的酶标板：先将链霉亲和素修饰到酶标板上，再利用生物素与链霉亲和素的强相互作用将5’端带有生物素标记的核酸适配体固定到酶标板上；所述的核酸适配体的序列为SEQ ID NO：1；(2)捕获反应：利用上述酶标板在捕获反应溶液中与样品温育，捕获样品中的中性粒细胞弹性蛋白酶，分离，用洗涤溶液洗涤；(3)酶催化反应：将含有中性粒细胞弹性蛋白酶底物的酶反应溶液加入到捕获反应后的酶标板中，在37°C下进行酶催化反应；加入酶反应终止溶液，终止催化反应；所述的中性粒细胞弹性蛋白酶底物为生色底物；(4)检测：测定催化反应终止后溶液的吸光度；根据中性粒细胞弹性蛋白酶的标准品所得检测结果，绘制标准曲线，根据待测样品的检测结果，对照标准曲线求出待测样品中中性粒细胞弹性蛋白酶的含量。